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ELISAについて
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No.4931-TOPIC - 2016/03/18 (金) 21:42:07 - あきぽん
いつも拝見させて頂いております。
ELISAを設計することになり、初心者でどうしようか迷っています。
@直接ELISAか間接ELISAかは皆様はどのように選択されていますでしょうか。
AサンドイッチELISAで、貼り付ける抗体と1次抗体が同じ蛋白配列から作製されたポリクローナル抗体とモノクローナル抗体しかない場合、ポリクロとモノクロであれば目的の蛋白は検出可能なのでしょうか。
Bビオチンを使うかどうかはどのように判断されていますか。
よろしくお願い致します。
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No.4931-3 - 2016/03/19 (土) 10:33:42 - mon
trackerさんと同意見ですが、追加(言い換え)で
(1)に関しては、原理を考えれば、「目的物の純度(不純物の多さ)・目的物の固相化されやすさ(固相化量・比率)」=「どの程度の感度が必要か」で決まるでしょう。また「測定対象に類似物が含まれるか否か」=「特異性をどの程度担保する」かも検討項目です。
もう一点、ポリクロの場合ロット差が出やすいので、ご注意ください(モノクロでもロット差はありますが)。
(無題)
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No.4931-2 - 2016/03/18 (金) 23:02:43 - tracker
直接法(標識1次抗体を使う方法ですよね?)は普段やらないので答えられなくて申し訳ないですが…@とBに関しては検出に増幅をかませる意味で間接法にしたりアビジン検出にしたりするかなと思います。
Aは同じタンパク配列から作製されたと書かれていますが、同じペプチド抗原ということですか?
いやまあ、どちらにしろそれらの抗体が抗原に対して互いに競合的に結合するのであればキビシイと思います。
競合関係にあるかどうかを確かめる実験が必要ですよね
ELISAについて
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No.4931-1 - 2016/03/18 (金) 21:42:07 - あきぽん
いつも拝見させて頂いております。
ELISAを設計することになり、初心者でどうしようか迷っています。
@直接ELISAか間接ELISAかは皆様はどのように選択されていますでしょうか。
AサンドイッチELISAで、貼り付ける抗体と1次抗体が同じ蛋白配列から作製されたポリクローナル抗体とモノクローナル抗体しかない場合、ポリクロとモノクロであれば目的の蛋白は検出可能なのでしょうか。
Bビオチンを使うかどうかはどのように判断されていますか。
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