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100mm dishの培地量を減らしたい トピック削除
No.4905-TOPIC - 2016/03/08 (火) 20:22:05 - 赤
培養細胞(Hela)をある薬剤で処理したいのですが、薬剤のストックが結構限られているのでできるだけ節約して使いたいと思っています。
何日も培養するわけではなくて、12時間程度維持できれば良いので、処理濃度を保ったまま培地量を減らせないかと考えております。

結果に影響がないかどうかとかは複雑になってしまうので、今回は細胞生存率の観点で、どの程度まで培地量を減らせるか(or 減らしたことがあるか)というのを皆様に伺いたく思います。
減らしすぎると塩濃度上昇、pH緩衝能等、最悪乾燥してしまうかと思いますが、、
経験のある方がいらっしゃいましたら是非お声をいただきたく思います。
よろしくお願い致します。
 
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No.4905-5 - 2016/03/09 (水) 08:41:45 - 赤
おお様
コメントをいただきありがとうございます。
5-6mlでも増殖するとのことで、そこまで減らすことができればかなり節約できそうです。
確かに乾燥はフラスコの方が防げそうですね。75平方cmのものであれば培養面積もほとんど変わらないのでいいですね。
ちょうどラボにあるのでそちらでトライしてみます。
ありがとうございました。

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No.4905-4 - 2016/03/09 (水) 06:51:56 - おお
HEKを使ってますが、増殖させるときは10cmで5ー6mlです。このばあい48時間以上はむりです。

細胞が違いますが、12時間ならフレッシュな培地であれば4mlでも行けそうな気がします。乾燥が不安ならフラスコをつかい、ベント用のフィルターがないタイプで培地のpHが整った状況で蓋をきっちり閉めてしまったらいいかもしれません。まあ蓋を閉めなくても、10cmDishよりは乾燥しにくいかなとも思います。

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No.4905-3 - 2016/03/08 (火) 21:09:57 - 赤
poppo様
早速のコメントありがとうございます。
あるタンパク質がこの処理時にlipid付加を受けることがわかっており、それを精製しようとしているのである程度の細胞数が必要です。
普段の培養はこちらも10mlで行っておりますが、7mlでも可能なのですね。
コメントいただきありがとうございます。

(無題) 削除/引用
No.4905-2 - 2016/03/08 (火) 20:48:28 - poppo
100mmディッシュでないといけない理由は?
そんなに細胞が必要な実験?
100mmは通常10ml、節約時は7mlで培養してたりしましたが、5mlだとよくなかった記憶が

100mm dishの培地量を減らしたい 削除/引用
No.4905-1 - 2016/03/08 (火) 20:22:05 - 赤
培養細胞(Hela)をある薬剤で処理したいのですが、薬剤のストックが結構限られているのでできるだけ節約して使いたいと思っています。
何日も培養するわけではなくて、12時間程度維持できれば良いので、処理濃度を保ったまま培地量を減らせないかと考えております。

結果に影響がないかどうかとかは複雑になってしまうので、今回は細胞生存率の観点で、どの程度まで培地量を減らせるか(or 減らしたことがあるか)というのを皆様に伺いたく思います。
減らしすぎると塩濃度上昇、pH緩衝能等、最悪乾燥してしまうかと思いますが、、
経験のある方がいらっしゃいましたら是非お声をいただきたく思います。
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