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生細胞の蛍光タイムラプス撮像 トピック削除
No.4876-TOPIC - 2016/02/25 (木) 10:29:35 - WoW
二色程度の蛍光で生細胞のタイムラプスイメージングをやりたいのですが
設備もお金もありません。。。
蛍光顕微鏡はあるので、こういうもの
blst.co.jp/3products/131.html
でやるのが現実的かと考えているのですが
(今ある蛍光顕微鏡をインキュベーターに入れて使うのは難しいです)
実際のところいい感じの蛍光像が得られるものでしょうか?
フォーカシングとか結露とかその辺大丈夫なのかご経験があれば教えてください。
 
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(無題) 削除/引用
No.4876-8 - 2016/02/25 (木) 13:19:14 - おお
>[Re:7] 独り言さんは書きました :
> 細胞内構造とかのリアルタイムならともかく、
> もし細胞増殖とかおおまかな細胞観察であれば、
> グリッドつきのdishを使って、もしくは自分でdishの底に目印になるようにマジックで線引いて、普通のインキュベーターで培養しつつ、観察時のみ、グリッドを指標に同じ細胞を観察することは可能ですよ。
>

あ、確かに!

(無題) 削除/引用
No.4876-7 - 2016/02/25 (木) 13:06:45 - 独り言
細胞内構造とかのリアルタイムならともかく、
もし細胞増殖とかおおまかな細胞観察であれば、
グリッドつきのdishを使って、もしくは自分でdishの底に目印になるようにマジックで線引いて、普通のインキュベーターで培養しつつ、観察時のみ、グリッドを指標に同じ細胞を観察することは可能ですよ。

(無題) 解決済み 削除/引用
No.4876-6 - 2016/02/25 (木) 12:23:17 - WoW
皆様有難うございます。
いろいろ難しそうなので、ちゃんとしたタイムラプス用顕微鏡を
デモなりレンタルなりで使う方向で検討したいと思います。
共同利用させてくれるところがあると一番なんですが、
なにぶん僻地に生息しておりますゆえ。。。

(無題) 削除/引用
No.4876-5 - 2016/02/25 (木) 12:18:23 - おお
フォーカスとかは見るものや、倍率にもよるかもしれません。必要ならZ軸スキャンでデコンボ使うか。

(無題) 削除/引用
No.4876-4 - 2016/02/25 (木) 12:15:59 - おお
ステージが温度を保てるやつがあるけど、必要ないですか?
乾燥は使う容器やレンズにもよるかもしれませんが、ミネラルオイル重層でやってる人がいます。培地はL-15だったかな、CO2が必要ない培地もありますのでそういうのでやればレギュレーター設置とかそれ関係のシステムを揃えないでいいかもしれません。

(無題) 削除/引用
No.4876-3 - 2016/02/25 (木) 10:52:10 - cf
CO2コントローラーもあるし1日程度培養できるということなので、その間は細胞を生きたまま観察できると思われます。結露よりも乾燥が心配です。
ただ、かなり簡易的なのでちょっとした振動でも焦点や視野がずれてしまう危険性はありそうです。
一番の難点は、励起光の照射をどうやってコントロールするかで、当てっぱなしでは細胞に障害もあるし、なにより蛍光が褪色してしまいます。
撮影する時だけ照射できるようなシャッターを自作するか、見つけてこないといけないでしょう。

おそらくデモもあると思うので一度相談してみるのが早いし確実です。
もしくは1週間程度で結果がでるのであれば、大手のタイムラプス蛍光観察用の顕微鏡のデモをお願いして、データをとってしまうのも手です。

(無題) 削除/引用
No.4876-2 - 2016/02/25 (木) 10:49:15 - mon
タイムラプスの時間によりますが、CO2レギュレーターも揃えるとかなり高価です。短時間ならHEPES等で培地のpH変動を抑えられます。
使用頻度にもよりますが、大学の共同利用施設で外部者でも有料で機器を使用出来るところも増えていますので、問いあわせてはいかがでしょうか。

生細胞の蛍光タイムラプス撮像 削除/引用
No.4876-1 - 2016/02/25 (木) 10:29:35 - WoW
二色程度の蛍光で生細胞のタイムラプスイメージングをやりたいのですが
設備もお金もありません。。。
蛍光顕微鏡はあるので、こういうもの
blst.co.jp/3products/131.html
でやるのが現実的かと考えているのですが
(今ある蛍光顕微鏡をインキュベーターに入れて使うのは難しいです)
実際のところいい感じの蛍光像が得られるものでしょうか?
フォーカシングとか結露とかその辺大丈夫なのかご経験があれば教えてください。

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