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ミトコンドリアマトリクス蛋白のGFP標識 トピック削除
No.4864-TOPIC - 2016/02/20 (土) 15:14:32 - おお
ミトコンドリアのマトリクス蛋白のC末にGFPなど、蛍光蛋白のタグをつけたりした経験がある方とか、そういうことに詳しい方がいらっしゃれば教えてほしいのですが、、、

昔見た文献の記憶とたどると、細胞質で立体構造をとってしまった蛋白はミトコンドリアにImportされにくいらしいです。GFPなどタグがある場合、細胞に発現ベクターを導入してもミトコンドリアにあまり入らないとかありますでしょうか。また入るけどGFPの3次構造が形成される前に入るとか、そういう場合はマトリクスで従来の構造をとってないので光らないとか、、、そんなことをああでもないこうでもないと考えてます。

お知恵を拝借させていただきたく思います。
 
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No.4864-4 - 2016/02/21 (日) 03:50:33 - おお
CoXVIIIのMTSを使っているようです。この蛋白自体はInner membraneに挿入されますね。でもTOMコンプレックスを通るなら、構造による障害は気にしなくていいかもしれませんね。もう少し調べれるときに突っ込んでみます。

(無題) 削除/引用
No.4864-3 - 2016/02/20 (土) 16:51:36 - おお
あ、たしかにそのマーカーは使ってるんですけど、これってマトリクスに入ってるんですかね。。。ミトコンドリアを標識するのに必ずしもマトリックスに入る必要はないでしょうから、、、構造的にはRFPとMTSしかないみたいなので、やはりTOM20くぐってるみたいな気もしますが。このMTSはどれ使ったんだろ。。。てか調べてみます。

(無題) 削除/引用
No.4864-2 - 2016/02/20 (土) 16:25:11 - 独り言
一般的にミトコンドリアをGFPで標識するために使われているベクターはGFPのN末にシグナルペプチドを付けただけで、問題なくミトコン内に入りますよ。
http://catalog.takara-bio.co.jp/product/basic_info.php?unitid=U100004774

GFPが細胞質でfoldingされていてもunfoldingされて入るのか、foldingされる前に入るのかわかりませんが、少なくともGFPを付けても細胞質に蓄積するようなことはないです。

ミトコンドリアマトリクス蛋白のGFP標識 削除/引用
No.4864-1 - 2016/02/20 (土) 15:14:32 - おお
ミトコンドリアのマトリクス蛋白のC末にGFPなど、蛍光蛋白のタグをつけたりした経験がある方とか、そういうことに詳しい方がいらっしゃれば教えてほしいのですが、、、

昔見た文献の記憶とたどると、細胞質で立体構造をとってしまった蛋白はミトコンドリアにImportされにくいらしいです。GFPなどタグがある場合、細胞に発現ベクターを導入してもミトコンドリアにあまり入らないとかありますでしょうか。また入るけどGFPの3次構造が形成される前に入るとか、そういう場合はマトリクスで従来の構造をとってないので光らないとか、、、そんなことをああでもないこうでもないと考えてます。

お知恵を拝借させていただきたく思います。

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