Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

新しいトピックを作る | トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

25件 ( 21 〜 25 )  | 次  1/ 1. 2. /2


(無題) 削除/引用
No.4843-5 - 2016/02/14 (日) 16:49:28 - み
上手くいってなくて、しかも自身で解決できないのに頭でっかちなことをいうあたり、、、。
まあそれはさておき。
1マイクロリットルなど少量の添加が上手くできていないかも。
毛細管現象で逆流してチップから吐き出せていないのかな。
初心者には良くあること。
あなたが混ぜたものをホットスタートなしでかけるとか色々バリエーションを用意すれば解決する話じゃないですか。

(無題) 削除/引用
No.4843-4 - 2016/02/14 (日) 15:59:43 - PCR指導者
おお様からお知恵をお借りいただけるとは大変嬉しくおもいます。ありがとうございます。

Taqはhomemadeのものでラボテクの方が精製、調整、管理されてるものです(当方アメリカ在住です)。

とするとホットスタートが大事なのかもしれませんね。まったくmake senseではありませんが。。24歳にして本当に頭の良い子なのでその子の主張を尊敬してしまうんです。理由はよくわからないんだけど、こうやるとうまくいくようなんだ、というのが情けないというか科学的でないというか、、、

(無題) 削除/引用
No.4843-3 - 2016/02/14 (日) 15:45:35 - おお
When you have two choices--one is working and the other is not working, which one would you chose?

タックは種類によるかもしれませんが、室温で混ぜてもそんな影響がないかなと思います。ホットスタート(氷上からいきなりブロックにおくなど)は物によってはそれでないとうまくかからないものもたまにあります。

doesn't make sense

Ok, what do you think is the problem. If you do not have any other idea, shouldn't you try my protocol first?

(無題) 削除/引用
No.4843-2 - 2016/02/14 (日) 15:40:55 - PCR指導者
原則ではなく、経験則なのだ、ということをお伝えしたらいいのでしょうか?

PCRの指導法について 削除/引用
No.4843-1 - 2016/02/14 (日) 15:16:21 - PCR指導者
PCRの指導法についてお知恵をお貸しください。

今学部上がりの中国のPhD学生にPCRをやってもらっています。
私はこれまでに目的の遺伝子を特定のプライマーできちんと増幅できているのですが、彼女がやるとどうにも PCRがかかりません。

ゲノムのサンプルまで全く同じなのですが、どうしてこういうことが起こるのでしょうか?

私は氷上で、 PCRチューブに水、buffer、dNTP、Primerを入れ、ボルテックスしたのち、Taq polymeraseを加え、穏やかにpipatingしています。その後、ゲノムおよびネガコンの水を1 ul入れた新しいPCRチューブを氷上に置き、先ほどのmaster mixを24 ulずつ入れ、それをあらかじめ95℃になっているサーマルサイクラーに氷上から一気に置いてから PCR反応させています。

その子はどのような順序でmaster mixを作っているかわかりませんが、すべての操作は室温で行ってるみたいです。またサーマルサイクラーもおそらく室温の時にサンプルを置いていて、そのままstartボタンを押してPCRをスタートしてるようです。

彼女はshould be no problemというのが口癖なのかと思うほど、きちんと頭で考えていて、いい加減(私からみたら)でも問題ないだろうというのがあるのだと思います。

彼女がPCRがかからない原因はわかりませんが、氷上で PCRの反応液は作りなよー、とか私が好む95℃になってることを確認してからPCRサンプルを置きなさい、なんて言うと、そんなのはdoesn't make senseだよ、と言われてしまいました。

Taqはhot start用ではないので、きちんと氷上でmaster mixを作るべきだとは思うのですが、それ以外ではうん、確かに私自身それほど強く強制して何かが改善されるかどうか曖昧ではある、と思って躊躇っています。因みに私の PCRプロトコルでは100%シングルバンドが綺麗にでますが、彼女がやると全く出ません。

25件 ( 21 〜 25 )  | 次  1/ 1. 2. /2


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。