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上手くいきました 削除/引用 No.4820-5 - 2016/02/09 (火) 21:38:24 - まゆ 皆様 回答ありがとうございました。 説明書等を見直した結果，リアルタイムにかける機械の方の設定が上手くいっておりませんでした。 皆様の貴重なご意見を参考にし，生かしてこれからリアルタイムPCRを精進致します。 本当に有り難うございました。

(無題) 削除/引用 No.4820-4 - 2016/02/06 (土) 03:44:37 - しろ 10分の1取る量が少なすぎるて次のチューブにうまく入っていない、もしくはよく混ざっていないとか。次の希釈をするときチップは新しいものに変えていますか？変えないよりも変えたほうがきれいな直線になった経験があります。

(無題) 削除/引用 No.4820-3 - 2016/02/06 (土) 00:28:27 - おお 高濃度のところは量が多すぎるとかでしょうか。cDNAなんかだと量が多いところで歪んでくるという話も聞きます。

検量線用の鋳型は何？ 削除/引用 No.4820-2 - 2016/02/05 (金) 21:04:01 - ふみ 検量線用の鋳型が適当な試料由来のcDNAだったりするのでしょうか。 精製したDNAが鋳型で検量線が山形になることは想像しづらいです。 もしそうなら非常に興味深いです。 ところで、何かうまくいかないことがあるときに、試薬の説明書と実験書をよくよむのがとても大事です。 そういう手順を踏んだら、定量PCRをするために検量線をかくとしても、幾つかの方法があることが分かるはずです。そして、そのようなことが分かれば、質問をするにしてもどのような方法を採ったのかを最初から書けただろうと思います。 今後はそうされることをおすすめします。

リアルタイムPCR　検量線作成について 削除/引用 No.4820-1 - 2016/02/05 (金) 17:00:03 - まゆ リアルタイムPCRについて質問させてください。 段階希釈して作成するスタンダードカーブ（検量線）が直線にならず，山形になります。 （赤色四角がスタンダードです） 1/10毎希釈に用いた従来使用してきたRNA Free水が悪いかと思い， 業者（キアゲン）のRNA Free水を使用しましたが，直線になりませんでした。 また，チューブへの吸着を考え，他のメーカーのチューブに変えてみましたが， それでも同じように山形のなります。 どういったことが考えられますでしょうか？ よろしくお願いします。

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