BioTechnicalフォーラム [ThunderBIrd (QPCR キット）の析出、沈殿について]

ThunderBIrd (QPCR キット）の析出、沈殿について

No.4800-TOPIC - 2016/02/01 (月) 14:52:52 - SB

みなさん、お手持ちのTOYOBOのSyberGreen qPCR製品Thunderbirdを高速(15000rpmx1min)で回転させると沈殿物が確認されますか？？？

その製品を今まで使用していたのですが、最近になって原液のチューブをスピンダウンすると沈殿物が確認されることに気が付きました。緑白色の沈殿物で、青色光を当てると強烈に緑に光るのでSyberGreen色素を含む沈殿物です。ラボにある異なるロットおよび周りの研究室がもっている同じ製品を遠心すると同様に沈殿が観察されます(少量の沈殿ではなく、結構析出しています）。気持ち悪いので、使用するのを躊躇しています。
もし、お手元に同じ製品があれば、試しに遠心してみてくれませんか？
　

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No.4800-11 - 2016/02/04 (木) 10:12:06 - SB

>みさん
> ちなみにffsさんはスピンダウンと言っているだけで1分と言ったのはトピ主だよね。

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3 コメントで成り済ましはあっても、トピ主が成り済ます意味がない

遠心してみました

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No.4800-10 - 2016/02/02 (火) 12:48:10 - ふみ

Thunderbirdを使っています。
チビタンで10秒遠心しても沈殿物は見えませんでした。
何度かやりましたが同じ結果でした。

1.5万rpm 1minのような条件は試しませんでした。
というのは、以前冷蔵庫内で沈殿ができたときに、よく分散させてからPCRをしたけれど、結果が思わしくなかったからです。

(無題)

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No.4800-9 - 2016/02/02 (火) 10:06:23 - み

確かに白い沈殿は析出するよ
何回か転倒混和すると溶解して透明になったはず

転倒混和するから当然スピンダウンするよね

1分もする必要なく所謂チビタンのようなもので1秒で落ちる

ちなみにffsさんはスピンダウンと言っているだけで1分と言ったのはトピ主だよね。

(無題)

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No.4800-8 - 2016/02/02 (火) 09:59:21 - sybr

SBとffは同一人物のようですね。
名前と言葉遣い変えて何してるんだか。
SYBR Greenが保存しているうちに沈殿するのは普通。

http://www.clontech.com/xxclt_ibcGetAttachment.jsp?cItemId=17467

http://bio.lonza.com/uploads/tx_mwaxmarketingmaterial/Lonza_ManualsProductInstructions_Sybr_Premix_Ex_Taq_FAQs.pdf

メーカーに問い合わせても同じことを言われるだけ。
それよりスピンダウンが15000rpmで1分が普通だと思わない方がいいよ。

(無題)

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No.4800-7 - 2016/02/02 (火) 09:43:31 - SB

皆さんコメントありがとうございます。

遠心すること自体にコメントを求めているのではありません。
遠心すると析出物が沈殿してくる商品に疑問を持っているので、皆さんのご経験を聞いています。
ちなみに、メーカーにも既に問い合わせています。

(無題)

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No.4800-6 - 2016/02/01 (月) 21:16:21 - sybr

ちなみに他メーカーのSYBR green mixでも沈殿が生じることがあって、遮光して室温か手で溶かせと書いてます（ボルテックス不可）。
ただでさえ沈殿が生じやすいものを、15000rpmで遠心したら余計沈殿するだろうし、スピンダウンなんて卓上の小さい遠心器で数秒かければ十分。

(無題)

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No.4800-5 - 2016/02/01 (月) 21:02:15 - tana

メーカーに問い合わせるのが先なのでは。
しばらくRTでローテートすると消えると言われて終わりでしょう。