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(無題) 削除/引用 No.480-11 - 2012/05/10 (木) 17:17:33 - 免疫染色 やはりうまく切片作成ができていないからなのでしょうか。。。 スライドガラスは松浪のMASコートもしくはAPSコートを用いています。 なのでそこまで問題ないかと… いつも目的部位でずたずたになってしまうのでつなぎ合わせて計測という訳にはいかないのです。 本当にいろいろご指摘ありがとうございます！ 様々な観点から問題を見つめることができました。 今までのトラブルシューティングを思い出し、今一度自分で頑張ってみます。

(無題) 削除/引用 No.480-10 - 2012/05/10 (木) 17:11:18 - う 決めつけるのもなんですが・・・ 私の経験上、うまく切れていない切片でも キシレンまでは引っ付いてます。 このことを書こうかと思ったくらいです（後だしですが） あと、前任者が使っていたからOKとするのもわかりますが、 それぞれの技量で変わりますので、スライドグラスの可能であれば検討もお勧めします。 松浪のMASコートなど。 もし、パズルになっていても、引っ付いていれば 倍率を高くしてクローズアップして画像をとればいいということであればですが。

(無題) 削除/引用 No.480-9 - 2012/05/10 (木) 16:41:45 - 免疫染色 ご指摘ありがとうございます。 私自身切片作成時に問題があるかもしれないと思っているのですが、 もう残りのパラフィン包埋されているサンプルもなく、今ある切片でなんとか免疫染色ですべきことをしてしまいたいと思っている次第なのです。。。 キシレン後にはまだ大丈夫なのですが そのあとのエタノールの段階ではもうパズル状にずたずたになりかけている切片もある状態です。。。 しかもすべての切片がずたずたになるのではなく、例えば20枚免疫染色すればそのうち約10枚弱がずたずたになるかんじです。。。

(無題) 削除/引用 No.480-8 - 2012/05/10 (木) 16:34:04 - う 他の方も指摘されていますが、 私は切片がうまく切れていないような気がします。 脱パラ前では、組織がパズル状になっていても パラフィンで固められていますし、 ま、それだとキシレンでもはがれる確立は高いですけど・・・。 キシレン後にはがれていることは無いのでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.480-7 - 2012/05/10 (木) 15:10:11 - 免疫染色 いえいえ、わざわざご返信ありがとうございます。 一度パラフィンを落とす目的にキシレンだけ行ってみようと思います。 ①の後では組織切片の構造はきれいに保持されていますが、これも今一度検鏡確認してみようと思います。 パラフィンにはそこまで汚れも見られず特に問題はないかと思われます。 様々なご指摘ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.480-6 - 2012/05/10 (木) 14:26:04 - 組織 返信を忘れていました、申し訳ありません。 ④から⑦の工程は今のままでいいんじゃないでしょうか。キシレンは5分くらいつけておいてください。 ③の処理について、パラフィンを落とす目的ならキシレンだけでも十分です。 あと、もう一度確認ですが、①の後では組織切片の構造はきれいに保持されているのでしょうか？この状態でも鏡検すればある程度確認できるので、薄切自体に問題ないかチェックされてはいかがでしょうか。 他の可能性としては、包埋用のパラフィンは新しいものを使ってますか？ 使い回しで汚れていたりはしていないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.480-5 - 2012/05/10 (木) 12:41:29 - 免疫染色 ご返信ありがとうございます。 そうですか、、一度③をせずに脱パラをおこなってみようと思います。 切片の状態ですがうまく文字で表せなくて申し訳ないです。 どちらかというと “全体的にパズルのようにばらばらで、それがスライドグラスにひっついているものや浮遊して無くなったりしている”というのが正しいかもしれません。 スライドガラスに関しましては以前この研究室でこのスライドガラスを用いて免疫染色をおこなっていたので問題ないと思います。 ③の行程を省略した場合、脱パラの行程は今のままでいいのでしょうか？？ よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.480-4 - 2012/05/10 (木) 11:47:48 - う 個人的に、③はやったことありません。 個人的に、質問者さんがおっしゃる③の理屈を聞いたことがないくらいです。 まず聞きたいことですが、 切片がずたずたになっている、とは 例えば、丸い組織があるとして、 その丸い輪郭はあるのだけれども、破れたようになっているのか 全体的にパズルのようにばらばらで、 それがスライドグラスにひっついているものや浮遊して無くなったりしているのか どういう感じなのでしょうか？ 前者と後者で共通して私が考えるのは、 パラフィンは切れているが、組織は「ガリッ」っとつぶすような感じで 切れているので、脱パラすると組織が壊れた感じになっている。 後者では、スライドグラスの質や種類が適当では無く、引っ付きが良くない。 いずれにしても、表現が抽象的でよく想像できません。

(無題) 削除/引用 No.480-3 - 2012/05/02 (水) 18:43:28 - 免疫染色 返信ありがとうございます。 ①で乾燥させたあと、特にこれといった症状は見られませんでした。 実験していて思ったことは③の工程が終わったくらいからずたずたになっているような感じがしています。 ③の時間はいろいろ試してみてはいるのですが。。。 ③の工程は省略可能なのですか？？目的部位の周りについているパラフィンを溶かすために必要なのではないでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.480-2 - 2012/05/02 (水) 18:19:30 - 組織 ①で乾燥させた後には症状は出てないのでしょうか？ ここを見れば、ブロック作成まで、薄切（はり付け）、脱パラフィンのどの工程に問題があるか見当つけられるんじゃないでしょうか。 以下、プロトコールに関するコメントです。 ②切片保存は通常室温でも問題ない（むしろ切りだめしない方がいい） ③省略可

パラフィン切片について 削除/引用 No.480-1 - 2012/05/02 (水) 17:10:41 - 免疫染色 いつもお世話になってます。 パラフィン切片で免疫染色をおこなっているんですが、パラフィン切片を脱パラフィンするだけで切片がずたずたになってしまいます。パラフィン伸展からスライドガラスへの貼り付けまではうまくいっているように思うのですが。。。なにが原因かわからずに困っています。教えていただければ幸いです。 現在以下のようにおこなっています。 ①パラフィン伸展後、スライドガラスに貼り付け37℃ 一晩 ②切片保存は4℃ ③60℃で1時間 ④100%キシレン 3回 ⑤100%エタノール　3回 ⑥50%エタノール ⑦蒸留水 この段階でもうすでに切片がずたずたになっているものもある状態です。 やはりパラフィン伸展からスライドガラスへの貼り付けの段階に原因があるのでしょうか？ ご教授いただければ幸いです。

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