全2件 ( 1 〜 2 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.4780-2 - 2016/01/26 (火) 02:08:11 - おお まあノンスペならそう言うこともあるでしょう。そのノンスペが2ndのPCRで増えて、本物と思ってしまう運悪の事態にならなくってよかったです。 理想的な計算をすると35サイクルもまわせば1コピーを検出できることになります。同時にあまりサイクル数を増やすとノンスペのバックグランドもあげるので、RTPCRがあまりうまくいってない可能性も考えてもいいかもしれません。 また違う見方をすると40サイクルとか回してかかっていても、酵素が大丈夫というかへたっているかもしれないっていう印象すらあります。ほかの遺伝子などはどうでしょうかアクチンとかだと16サイクルも回せばバンドが見えるはず。 RNAのクオリティー、精製方法、RTの方法、プライマーなどいろいろ検討する余地があるかもしれません。

PCRで消えるバンド 削除/引用 No.4780-1 - 2016/01/26 (火) 00:30:53 - 11 ある組織由来のｃDNAをPRIME STAR GXLを使ってRT-PCRを行い 増幅をかけています。 ３５サイクル回したときバンドが充分増えていなかったため、 改めて４０サイクルまで増やし、再び増幅をかけたところ、 バンドが消失してしまいました。 別の組織由来のｃDNAを使用した場合、 こちらはもともと発現量が多いのですが、 ４０サイクルまで順調に増幅がかかります。 ですから酵素の失活の可能性は除けると思います。 この現象の解釈を考えているのですが、 似たようなご経験の方いらっしゃいますか？

全2件 ( 1 〜 2 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---