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(無題) 削除/引用 No.4768-6 - 2016/01/22 (金) 11:49:55 - あ クロラムフェニコールを添加しているのでしょうか． クロラムフェニコール耐性はあるのでしょうか．

(無題) 削除/引用 No.4768-5 - 2016/01/22 (金) 10:37:43 - AP そうなる原因はわかりませんけれど、目的はそこじゃないはずなので、うまく行かなければ凍結融解にこだわることもないでしょう。 下流の精製法や使用目的にもよりますが、 1. 複数回の凍結融解サイクル 2. ソニケーション、フレンチプレスなどの使用 3. Triton X-100やNP-40などの界面活性剤の使用 4. 市販の溶菌試薬（BugBasterなど）の使用 など、単独、あるいは組合せでおこなえばいいと思います。

(無題) 削除/引用 No.4768-4 - 2016/01/22 (金) 08:40:48 - recombinant ありがとうございます。 >中年さん その可能性もありますね・・・。確認します。 >APさん DE3は確かに必要ありませんが、手元のpLysS株がちょうどそれだったので用いました。 不都合はないと判断したのですがまずいでしょうか？溶菌は見た目および検鏡での評価です。 コントロールは見た目にもクリアーでした。

(無題) 削除/引用 No.4768-3 - 2016/01/22 (金) 08:05:43 - AP lacプロモーターならDE3はひつようないですね。 溶菌が弱いとは何を見て判断したのですか。根拠となる観察を説明してください。

(無題) 削除/引用 No.4768-2 - 2016/01/22 (金) 07:55:16 - 中年 pLysSが落ちてしまっていませんか？

BL21(DE3)pLysSを用いたたんぱく質の発現 削除/引用 No.4768-1 - 2016/01/22 (金) 07:16:44 - recombinant お世話になっています。 BL21(DE3)pLysSを用いたたんぱく質の発現を行っています。 pET systemの10thマニュアルやこちらのフォーラムを参考にし、発現誘導後 凍結融解による溶菌を試みました。念の為に300µg/mLでのリゾチーム処理も行っています。 プロモーターはT7ではなくlac promoterを用いた発現を行っています。 しかしコントロールのempty vectorを用いたものでは一発の凍結融解で溶菌するのに対し 目的遺伝子を用いたものは溶菌がかなり弱いです。これは一般的によくある現象なのでしょうか？ よろしくお願いします。

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