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(無題) 削除/引用 No.4762-12 - 2016/01/26 (火) 13:27:04 - yakumo アルブミン固相にアルブミンでブロッキングはあまり好きじゃないですね。 相同性はそこまで高くないかも知れないですが、スキムミルクや魚ゲルなんかに変えたほうがいいと思います。交差性のある抗体を除きたいのであれば別の系を作って引き算したほうがうまくいくと思います。 後、NUNCのなんのプレートを使っているのかわからないですが、マキシソープなら少なくともアルブミンや抗体の固相では、問題が起こったことありません。（別にNUNCの回し者じゃないですよ）

(無題) 削除/引用 No.4762-11 - 2016/01/26 (火) 12:52:28 - mon OVAの固相化が安定していないとすると、NUNCのImmobilizer-AMINO plateなど、親水性リンカーに共有結合で固相化するものはいかがですか。

(無題) 削除/引用 No.4762-10 - 2016/01/26 (火) 12:40:51 - ｓ まっくろんさん 返信遅くなり申し訳ありません。 ぜひ参考にさせていただきます。 ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.4762-9 - 2016/01/22 (金) 19:02:25 - まっくろん うちでは、SerotecとBiolegendのコーティングバッファーを使ったことがありますが、どちらも上手くいきました。anti-mouse IgE抗体は、Serotecのビオチン標識のやつだったと思います。参考になれば幸いです。

(無題) 削除/引用 No.4762-8 - 2016/01/22 (金) 18:46:34 - ｓ まっくろんさん ご指摘ありがとうございます。 OVAで感作したマウスの血清で測っています。 またnuncのプレートを使用しています。 もしよろしければ、どのようなコーティングバッファーをお使いか教えていただけないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.4762-7 - 2016/01/22 (金) 18:21:24 - まっくろん 　ちなみに一度，細胞培養用を使ったことがありますが，まったくダメでした。そのようなことはないと思いますが，一応記載します。

(無題) 削除/引用 No.4762-6 - 2016/01/22 (金) 18:20:11 - まっくろん 　OVAを実験動物に投与して抗体を作らせて，その血清か何かを測っているということでしょうか。 　PBSよりはコーティングバッファーのほうがうまく行くと思います。私はコーティング用のバッファーを買って使っていますが，ネットで組成情報をいくらでも取れるので自作で良いと思います。 　また，プレートもまちまちです。コーニングやNuncのELISA用は問題なく使えました。スミロンのやつは。。。でした。あくまでうちでのことですが。

(無題) 削除/引用 No.4762-5 - 2016/01/22 (金) 17:58:21 - ｓ みなさんご指摘ありがとうございます。 ovさん 値はばらばらで、再現性がとれません。 anti-OVA IgEを購入して再度トライしてみます。 たていすさん ビオチンは抗マウスIgEについており、HRPはストレプトアビジンについております。 OVAとビオチンのコンタミの可能性はあまり考えられないのですが、例としてどのような場合にコンタミするのか教えていただけると助かります。 HDRさん PBSを使っていますが、カーボネートバッファーの方が良いのでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.4762-4 - 2016/01/22 (金) 13:37:36 - HDR ovaの固定化はPBSですか？弱アルカリのカーボネートバッファーがよかったりしますよね。ご指摘にあるように、ポジコンんを用意して検量線を引いて、きちんと系がワークするのかどうかをみるのがはやそうです。

(無題) 削除/引用 No.4762-3 - 2016/01/21 (木) 18:27:52 - たていす ビオチンは何についているのか、明示しましょう。 TMBを発色させるHRP?は何に付いているのか、明示しましょう。 プレートに固定化したOVAにはビオチンがコンタミしてたりしないのか？

(無題) 削除/引用 No.4762-2 - 2016/01/21 (木) 16:55:04 - ov 記載の内容だけだと問題点が不明確 同じ傾向がみられるのか、全く値がバラバラなのか、もう少し問題点をはっきりしましょう 市販のanti-OVA IgEを用いて検量線が描けないとか安定しなければ系の問題、それ以外はサンプルの問題

OVA特異的IgE測定 削除/引用 No.4762-1 - 2016/01/21 (木) 16:46:37 - ｓ ELISAキットを使わずに、OVA特異的IgEを測定したいのですが、 再現性がとれなかったり吸光度が低くなったりして 正確に測れずに困っています。 プロトコール OVAをプレートに固定 　↓ BSAでブロッキング 　↓ 　血清 　↓ 抗マウスIgE 　↓ ストレプトアビジン 　↓ 　TMB 　↓ 硫酸で反応停止 　↓ 450nmで測定 これで測定しています。 当方あまり知識がないため、ご享受のほどよろしくお願いいたします。

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