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Oil red O 染色でのゴミ? トピック削除
No.4759-TOPIC - 2016/01/20 (水) 16:02:06 - K
いつも勉強させていただいております。

組織のoilredO染色を行っております。
ここで、ゴミ?のようなものがいつも発生してしまい困っております。

凍結組織をスライスし、20% formalin in PBSで2h固定後、
水洗、60% isopropanolにディップ後、
Oil red O (0.3% oil red O in 60% isopro)を処理し、
そのままヘマトキシリンでカウンターステイン後、
水系封入剤でカバーグラスをかけております。

なおOil red Oは使用直前にstock solutionを希釈しております。

良い洗浄方法や、プロトコルをお持ちの方、お教えいただければ幸いです。
よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.4759-5 - 2016/01/21 (木) 09:31:55 - AP
これも参考に
http://link.springer.com/article/10.1007/s10616-004-3903-4

(無題) 削除/引用
No.4759-4 - 2016/01/20 (水) 19:05:13 - K
たていす様、AP様

大変参考になりました!
後日うまくいったとご報告できればと思います!
ありがとうございました!

(無題) 削除/引用
No.4759-3 - 2016/01/20 (水) 17:42:55 - AP
私はその日使用する分だけシリンジにとって、ディスクフィルターを通して使っています。ストック溶液を作るときにフィルターしても、保存している間に重合でも起こるのか、沈殿ができてきますので(長期間放置したままにしておくと、まるでワインの澱が沈むようにOROの沈殿が溜まって上澄みが澄んでくる)。

ProOHを使う方法が広く普及していますが、triethyl phosphate(TEP)を使ったほうがOROの溶解状態も良く、染色結果もいいようです。

http://link.springer.com/article/10.1007%2Fs004180100297

(無題) 削除/引用
No.4759-2 - 2016/01/20 (水) 16:38:55 - たていす
>Oil red O (0.3% oil red O in 60% isopro)を処理し、
この濃度では、おそらくOilRedOは、60%イソプロに溶解していないのではないでしょうか?使用直前に普通のろ紙で濾過する必要があると思います。

>そのままヘマトキシリンでカウンターステイン
よりも、オイルレッド染色後、60% isopropanolにディップして、その後でヘマトキシリンで対比染色するほうが良いだろうと思います。

Oil red O 染色でのゴミ? 削除/引用
No.4759-1 - 2016/01/20 (水) 16:02:06 - K
いつも勉強させていただいております。

組織のoilredO染色を行っております。
ここで、ゴミ?のようなものがいつも発生してしまい困っております。

凍結組織をスライスし、20% formalin in PBSで2h固定後、
水洗、60% isopropanolにディップ後、
Oil red O (0.3% oil red O in 60% isopro)を処理し、
そのままヘマトキシリンでカウンターステイン後、
水系封入剤でカバーグラスをかけております。

なおOil red Oは使用直前にstock solutionを希釈しております。

良い洗浄方法や、プロトコルをお持ちの方、お教えいただければ幸いです。
よろしくお願いいたします。

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