こんにちは！海外でテクニシャンをしている者です。
これまでにCRISPR-Cas9システムを使ったゲノム編集を行ってきており、いくつかのKOのセルラインの作製に成功しております。全てがん細胞や293Tを利用したものです。
質問というよりは、ご意見を伺いたいのですが、ある遺伝子の TgマウスのMEFから別の遺伝子のKOを作製してくれないかと言われました。このMEFはmassiveに増殖しているらしいのですが、1-cell sortingなどのクローニングに耐えられるか？疑問です。これまでがん細胞のセルラインで作ってきた時にはクローニングしていましたし、1-cellでsortする96-well plateにフィーダーを敷くなど工夫をしていました。
MEFとなるとフィーダー敷いていいの？とか、immortalizedされていないようですし、KO取れるのか疑問です。
確かにグーグルするとMEFでCRISPRでKOを作った論文を見つけることができましたが、どうでしょうか？MEFはヒトに比べてテロメアがめちゃくちゃ長い等は知っているつもりですが、印象としては難しい（96-well内でコロニーを生じにくい）のでは？と思っています。
もしここで皆様が同様のご意見をお持ちになるようでしたら、がん細胞などで最初に遺伝子の過剰発現を行い、それが終わればゲノム編集で今回の遺伝子のKOを作ればいいのでは？と帝愛してみようと思っています。
皆様どうお考えになられますか？ |
|
このスレッドをはてなブックマークに追加