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(無題) 削除/引用 No.4717-5 - 2016/01/05 (火) 07:47:09 - あー 初期接着率を測定するのにフラスコを用いるのは、いろいろと無駄が多すぎ。 96-well plateが理想的。 初期接着率ということなので、個々の細胞が十分離れているとして 1. 検量線を描いて、ホルマザン色素で定量 2. Hoechst色素を用いて核染色し、顕微鏡下で写真を撮ってImage Jで定量 が簡便。 血球計算盤があるなら、その写真をとればスケールになる。

(無題) 削除/引用 No.4717-4 - 2016/01/05 (火) 01:38:05 - しろ 初期接着数のカウントということで、plating efficiencyで検索するといくつかプロトコルが出てくると思います。おおさんのおっしゃるようにしばらく培養して染色してコロニー数を測るというやり方です。100か200cells/25cm^2が測りやすいと思います。ただ細胞によってはきれいなコロニーを作ってくれないのもあるので後で数えるのが難しい場合もあります。monさんのおっしゃるように顕微鏡下で接着細胞を測って面積との相対で測るのもいいかと思います。トリプシンではがしてカウントするのであれば、はがして培地との懸濁液を作って遠心後に上澄みをできる限り捨ててペレットと残った少量の懸濁液でリサスペンドして血球計算盤でカウントですかね。

(無題) 削除/引用 No.4717-3 - 2016/01/04 (月) 22:27:29 - おお コールターカウンターなどならたぶん測れるかな。。。そういう機械があるにはありますが、、、ないと測れないので、、、 DAPIやヘキストでDNAの蛍光値で相対的な細胞数（リファレンス、検量線をつれば絶対的な細胞数）が見積もれます。ただ細胞周期に大きな偏りがあれば、正確さに影響するでしょうけど。最大で２倍のバラ付きに理論的にはなるかと思いますが、実際はそんなにばらつかないと思います。 MTTなどの試薬は使えないのでしょうか。プロメがなどが細胞数など測るための試薬を各種出しています。細胞がインタクトな状態であれば、界面活性剤存在下でLDH活性をはかるというのもありかと（これもプロメがなどでキットが出てます）。 ちょっとまって ちょっとまって3000 cells/cm2で25cm2でトリプシンで回収して１mlだったら3000x２５cells？ それとも接着数が少なくって結局3000 cells/mLになる？それで測れないというなら3000 cells/mLって言う数字はどこから、、、それにしても生着率が低いと思えるけど、、、 もし密度が低くて可能なら、そのまましばらく培養して、ギムザとかメチレンブルーで染めてコロニーをカウントすればいいと思いますが。 なんだかわからなくなってきました。

(無題) 削除/引用 No.4717-2 - 2016/01/04 (月) 22:12:50 - mon 倒立顕微鏡の接眼レンズ付近に、視野に枠を表示するスライドさせるバー等がないでしょうか？ 枠を表示できれば、その面積と枠内の細胞数をカウントし（フラスコ数カ所でカウントし平均を取る）、フラスコ面積に換算すれば良いでしょう。 枠の大きさはマニュアルに載っているかな？無いようなら血球計算盤の目盛りからも計算出来ます。 枠が表示できないようなら、視野全体でカウントするか？（計数しやすい倍率を使ってください）

血球計算盤での細胞数カウント以外の方法 削除/引用 No.4717-1 - 2016/01/04 (月) 21:33:53 - 大きな木 3000 cells/cm2で25cm2フラスコに細胞を播種致しました。 初期接着数をカウントしたいのですが， トリプシンで剥がして1mLで回収すると 3000 cells/mL となって血球計算盤ではカウントできません(Burkerturkですと30〜100＊10＾4 cells/mLは必要かと思われます)。 何か正確にこの細胞密度の細胞数をカウントする簡便な方法は有りませでしょうか？ ご教示頂けますようお願い申し上げます。

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