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(無題) 削除/引用 No.4702-9 - 2016/01/08 (金) 14:50:00 - Loach 私も純水で溶血する事があります(文献はすぐに提示できませんが)。 血液100uLを遠心した後のペレットに900uLの純水を加えて3-5sくらいピペッティング。 10x salineを100uL加えて浸透圧を戻した後に軽く遠心して赤血球のゴミを取り除くだけです。 この方法を使いながらヒト好中球を回収してますが、機能に影響があるほどのダメージは感じません。 浸透圧を利用した溶血bufferは、程度の違いはあれど白血球にもダメージは当然有ります。 トピ主さんが回収した白血球で何がしたいのかによって回収方法を選択しなければならないでしょう。 FACSで解析するときに邪魔だから、という程度であれば白血球へのダメージはあまり気にしなくても良いので純水で溶血しても大丈夫でしょう。 一方で、特定の白血球のセンシティブな機能を評価したいということであれば、なるべくダメージの少ない方法(Percollなどの密度勾配)で赤血球を除くべきでしょう。

(無題) 削除/引用 No.4702-8 - 2016/01/08 (金) 11:27:30 - マウス monさま、 ありがとうございます、まさにこういうものを探していました。 HIHさま、 水ですと赤血球以外の細胞もダメージになりませんでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.4702-7 - 2016/01/07 (木) 15:28:46 - mon ご参考まで。 ttp://biochem2.umin.jp/contents/Manuals/manual64.html

(無題) 削除/引用 No.4702-6 - 2016/01/07 (木) 15:14:28 - おお HIHさま、私も質問があります。後学のため純水で溶血して白血球を回収プロトコールがかいた文献を教えて下さいませんでしょうか。また文献がないと引用するときに困りますので。

(無題) 削除/引用 No.4702-5 - 2016/01/07 (木) 15:06:18 - マウス みなさま、ありがとうございます HIHさま、 1.5 mLチューブに血液500 uL入っていた場合、 水をどれくらいいれますか? BufferというのはPBSかなんかでしょうか？ 遠心はどれくらいでしたら良いでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.4702-4 - 2015/12/30 (水) 10:54:06 - HIH 目的によりますが、純水で溶血するのが一番簡単ですよ。 ペレットに水ぶちこんで、すぐにBufferで希釈して遠心すれば白血球だけ残りますから。

(無題) 削除/引用 No.4702-3 - 2015/12/28 (月) 14:02:32 - おお http://dx.doi.org/10.4236/abb.2012.35082 キット化されたものの紹介ですが、昔の方法ものべられてます。 https://www.thermofisher.com/us/en/home/references/protocols/nucleic-acid-purification-and-analysis/rna-protocol/blood-fractionation-protocol-for-collection-of-white-blood-cells.html 遠心すると赤血球の上層にたまってるわけです。

(無題) 削除/引用 No.4702-2 - 2015/12/28 (月) 14:02:14 - よっしー 密度勾配法，溶血．

白血球分離 削除/引用 No.4702-1 - 2015/12/28 (月) 12:49:52 - マウス マウス全血(1 mL程度)から白血球を簡単に分離する方法を教えてください。古典的すぎるのか見つけられません。

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