Bio Technical フォーラム

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Blue light illuminator でGFP トピック削除
No.4693-TOPIC - 2015/12/24 (木) 16:04:53 - ライトン
電気泳動したGFPをゲル中で蛍光観察するための準備をしております。
もしくは96well plate中のライセート内のGFPを観察したいです。
蛍光imagerなどがないので、低価格で観察できそうな方法を探しております。

Sybr greenなどのDNA蛍光染色を観察するBlue light illuminator (LEDで470nm)は波長的にGFPにいけそうなのですが、実際に実用的なレベルなのかわかりません。

どのたか経験のあるかた、470nmのblue light illuminatorでGFP観察できますでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.4693-5 - 2015/12/25 (金) 09:49:53 - ライトン
フィルターが重要なのですね。
では光源だけでなく、フィルターもGFPみれるものを探してみます。

(無題) 削除/引用
No.4693-4 - 2015/12/24 (木) 17:34:23 - seventh
通常のDNA泳動ゲルの場合ではフィルターを通さないと励起光のほうが強すぎて蛍光は見えないので、励起できるかより使えるフィルターがあるかのほうが重要だと思います。

(無題) 削除/引用
No.4693-3 - 2015/12/24 (木) 17:23:43 - おお
> ただ、電気泳動がSDS-PAGEのことなら高次構造が壊れているので蛍光は観察できないでしょう。

むかしクロンテックの人が、GFPの構造は頑丈でSDSPAGEで泳動中でも蛍光活性をもっているとかいってましたが、なにか言っていることの中に矛盾があったので、指摘したらそうですねぇっていってました。SDSPAGE後in gelでrenatureできるならより良いかもしれません。

波長は問題なさそうですが、実用といわれると、フィルター、感度、扱う量(低感度でも量が検出限界より多ければいいということ)などいろいろ考慮しないといけないことがありますから、はいできますよはいいません。

(無題) 削除/引用
No.4693-2 - 2015/12/24 (木) 16:19:40 - lll
LEDでも波長があっていれば普通に励起はできますよ。
最近のプレートリーダーはLEDを光源に採用しているのもありますし。
"LED GFP"で調べればいろいろ参考になるサイトはあります。
ただ、電気泳動がSDS-PAGEのことなら高次構造が壊れているので蛍光は観察できないでしょう。
機器のデモを頼んで、自分で確認するのが一番かもしれませんね。

Blue light illuminator でGFP 削除/引用
No.4693-1 - 2015/12/24 (木) 16:04:53 - ライトン
電気泳動したGFPをゲル中で蛍光観察するための準備をしております。
もしくは96well plate中のライセート内のGFPを観察したいです。
蛍光imagerなどがないので、低価格で観察できそうな方法を探しております。

Sybr greenなどのDNA蛍光染色を観察するBlue light illuminator (LEDで470nm)は波長的にGFPにいけそうなのですが、実際に実用的なレベルなのかわかりません。

どのたか経験のあるかた、470nmのblue light illuminatorでGFP観察できますでしょうか?

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