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(無題) 削除/引用 No.4671-5 - 2015/12/18 (金) 21:38:00 - ああ ゆんさま ありがとうございました。 その他、リン酸化タンパクのフローサイトで何か気をつけるべきことはありませんでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.4671-4 - 2015/12/18 (金) 02:39:03 - ゆん それもあるでしょう。それよりもそもそも洗浄の意味は無いと思う。

(無題) 削除/引用 No.4671-3 - 2015/12/18 (金) 02:32:04 - ああ ゆん様 ありがとうございます。 それは洗浄をしているうちに、脱リン酸化が進む可能性があると言うことでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.4671-2 - 2015/12/17 (木) 12:46:35 - ゆん > 刺激は37℃で20分、2回洗浄した後、染色は、細胞の固定後... なぜ刺激後に洗浄（しかも二度も）が必要なんですか？ 必要ないでしょ。刺激後とっとと固定すべきです。

FACSでのリン酸化の検出 削除/引用 No.4671-1 - 2015/12/17 (木) 07:02:28 - ああ 末梢血由来の単核球に、IFN-gammaやPMAの刺激を加え、細胞質内のSTAT1-5のリン酸化を、フローサイトメトリーで検出することを試みています。 文献上、これらのリン酸化が見られることは間違いなく、抗体もメーカー側でFACSでの使用実績があるものを用いているのですが、あいにく私の手では検出が出来ません。 刺激は37℃で20分、2回洗浄した後、染色は、細胞の固定後、細胞膜透過処理と共に室温15分で行い、その後2回洗浄して、そのままフローサイトメーターで解析をしています。 FSC/SSCのスキャッター上では奇麗に細胞分画が分かれているのを確認できています。 何か、改善すべき点がありますでしょうか？ お知恵を拝借できればと思います。

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