現在、ATCCよりPC12細胞を購入して培養を行っています。
目的は、NGFにより神経様細胞に7日程分化させた後、種々化合物の神経突起に
対する毒性を評価するという目的です。
最終的にはtubulin beta IIIを免染して突起を評価したいのですが、
その前の培地交換で細胞が剥がれてしまい大変困っております。
培養条件は、
維持培養をRPMI1640+10% HS+5% FBS コラーゲンIコートにて、
分化条件は
維持培養したPC12を播種し、翌日にRPMI1640+1% HS+50ng/ml NGFに培地交換し、
2-3日おきに培地は交換しました。
コーティングは、既成品のコラーゲンIとコラーゲンIVを両方共試しましたが、
コラーゲンIの方は、一回目の培地交換でほとんどはがれてしまい、
コラーゲンIVの方はIよりはマシですが、結構剥がれてしまいます。
かなり汎用されている細胞なので、文献を読んでも様々すぎて、
どれがベストなのかよくわかりません。
使われている方、アドバイスいただけたら幸いです。
よろしくお願いします。 |
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