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(無題) 削除/引用 No.4626-2 - 2015/12/02 (水) 06:08:21 - おお 培養期間は必要な時間はかかるんだからそれは仕方ないです。コントロールはありますか?一つはKOしたからなのか、培養期間のせいでの変化かを見抜かないといけませんから。 比較できるコントロールを持つことである程度解決することもあると思いますので、安定導入株を作るときに、ベクターなどでコントロールをとり、シングルクローンをいくらかピックアップして比較的納得のいくクローンをひろうという手もあります(ただし恣意的になる可能性は否定できませんけど)。 293も293Tもヌードマウスで癌をつくりパイルアップする性質はもともと備えています。まあ長く培養するとダマになるというか細胞どうしがclumpしやすいというのは確かにあるような気がしますけど。

HEK293T細胞が変な増殖の仕方をしている 削除/引用 No.4626-1 - 2015/12/02 (水) 05:31:49 - CKO 今、HEK293T細胞を飼っています。CRISPRでゲノム編集した細胞でして、こいつにoff-target効果を否定する目的でノックアウトした遺伝子をレスキューしたいんです。一過性発現ではうまくいかなかったので安定発現株を取る予定です。 これまでの流れを書きますと、 液体窒素からHEK293T細胞を起こす -> CRISPRプラスミド導入 -> KOのスクリーニングに4 週間 -> 表現系解析 1-2 wks -> 安定発現株作製に取り掛かる←今ココ となり、この時点でかなり長くHEK 293T細胞を培養していることになります… 今後2-3週間かけて安定発現細胞を作製する予定ですが、果たしてこんなに培養してもいいのか疑問です… 一般にこういう実験に適した細胞株ってなんでしょうか？私は特に293Tである必要はなかったのですが、これまで扱った経験があることだったり、増殖が早いなどの点で用いました。 しかも最近のHEK293Tは横方向に増殖してくれず、pile upというのでしょうか隆起して増えていくようです…これで実験は行わない方がいいでしょうか？IFはまずできないけどwesternくらいはできるのかもしれませんが…

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