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AmiconUltra遠心式限外濾過フィルター 削除/引用 No.4614-8 - 2015/11/30 (月) 19:24:04 - さる NMさｎ、おおさん、うーんさん 返信ありがとうございました。 スピンカラム形式のもので、elution buffer以外の 組成が記載されておりませんでしたので、キットに 最適化されていることを危惧しておりました。 一度試してみたいと思います。 また、ミリポアに質問してみたところ、社内の検討結果 とのことで、具体的な問題点は教えていただけません でした。 どうもありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.4614-7 - 2015/11/28 (土) 15:58:01 - うーん どういった悪影響があるのかを、ミリポアに問い合わせて みたらどうですか。さるさんの用途でイミダゾールを 気にせず、そのまま使っている方は多いと思いますし、 私自身少々高濃度で使ってきたことも多いですが、 問題が生じた経験はありません。悪影響が下流の アプリケーションに問題にならなければよいはずなので‥。 また、elutionのイミダゾールは普通pH合わせてあるはずですが、 ミリポアが言っている100mM imidazoleはどのpH領域のこと なのかも気になります。 あと、私も200mM imidazoleで十分は同感です。 キットのプロトコルにはそんなに真面目に従うことは ないのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.4614-6 - 2015/11/28 (土) 15:51:14 - おお そういえばイミダゾールでなくても溶出できますよね。少し高濃度のEDTAとか。わたしもキットでいじれないというくだりがいまいちよくわからなかったです。

(無題) 削除/引用 No.4614-5 - 2015/11/28 (土) 15:39:00 - NM >[Re:3] さるさんは書きました : > Niカラムはキットを使用しております。 > 添付のelution bufferのimidazole濃度が500mMなので > ヘタにいじれないので実情です。 > いじっても大丈夫だと思いますが。 キットの中身はわかっていませんが、wash bufferなどで希釈して使ってみたら良いのでは？ 別のカラムにかけるにしても、アッセイに使うにしても、イミダゾールは邪魔ですから、濃度を下げておくことをお勧めします。

(無題) 削除/引用 No.4614-4 - 2015/11/27 (金) 20:52:07 - おお バッファー置換をするんだったら、結局薄めるわけですよね。。。

AmiconUltra遠心式限外濾過フィルター 削除/引用 No.4614-3 - 2015/11/27 (金) 16:39:43 - さる NMさん 早速のお返事ありがとうございます。 Niカラムはキットを使用しております。 添付のelution bufferのimidazole濃度が500mMなので ヘタにいじれないので実情です。 そうですね、ずいぶん昔に使用したことがあるのですが、 その時にはimidazole濃度については余り気にせず使用していた 覚えがあります。 どうもありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.4614-2 - 2015/11/27 (金) 12:41:11 - NM Niカラムからの溶出液のイミダゾール濃度を下げることはできませんか？ 経験上、ほとんどのタンパクは200mMあれば落ちてきます（20mMでも十分な場合も）。 （昔の説明書にはイミダゾールの濃度について書いてなかったのですが、最近のものは書いてありますね。どういった悪影響があるのかわかりませんが。）

AmiconUltra遠心式限外濾過フィルター 削除/引用 No.4614-1 - 2015/11/27 (金) 11:54:26 - さる お世話になっております。 Amicon ultra遠心式限外濾過フィルターの10kDaのものを 用いて、Niカラムからの溶出液を濃縮、バッファー交換したいと 考えています。 溶出液中には500mMのイミダゾールが入っておりますが、 説明書を読むとAmicon ultraのカラムの推奨として <100mM のイミダゾール濃度での使用が推奨されています。 使用する際には5倍以上の希釈が必要なもんなんでしょうか。 あるいは直接ではなく、透析等を噛ませた方がいいんでしょうか。 タンパク質の精製経験が余りありません。 ご教授いただければ幸甚です。 よろしくおねがいいたします。

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