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細胞保存方法 トピック削除
No.4588-TOPIC - 2015/11/13 (金) 12:06:22 - あああ
以前ここで RAW264.7 細胞の増殖・接着が悪いのでアドバイスを頂こうとスレを立てた者なのですが、最近新たに細胞を購入して増やしてから細胞をセルバンカーに溶かし、直接液体窒素に保存しました。

最初に増やしてる段階ではいきいきしていたのですが、再び液窒から起こした細胞は接着も増殖も悪くなってしまいました。

直接液体窒素に保存したことが原因で細胞がダメになってしまったのでしょうか?

普通は、-80℃に 24 h 保存してからその後に液体窒素に保存すべきだとネット上でみました。

細胞表面が傷ついても見えます。ここから細胞を復活させることはできますでしょうか?
 
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No.4588-6 - 2015/11/13 (金) 16:52:10 - あああ
やはり保存方法がダメでしたか・・・

自分が不勉強だったばかりに 10 万円する細胞をダメにしてしまったかもしれません。ちなみに細胞は ATCC で購入しました。

今のところ生き残ってる細胞を培養し続けていますので、微かな望みをかけて様子を見ていこうと思います。

(無題) 削除/引用
No.4588-5 - 2015/11/13 (金) 14:50:48 - よっしー
細胞を保存する場合は,一度保存した細胞のうちの1本を起こしてみて,問題ないことを確認するまでは,元の細胞を維持し続けましょう.1日2日の話なのでたいした手間ではないですしね.

(無題) 削除/引用
No.4588-4 - 2015/11/13 (金) 12:39:57 - cell
どこから細胞を手に入れたかによりますが、理研などでは細胞の状態が悪い場合は再分譲してくれる場合もあります。
今回は使用者側に問題があるので無償になるか微妙ですが、相談してみた方が良いでしょう。
生きてるかどうかわからない細胞から生きている細胞だけとってくると、性質が変わっている可能性が高いので、あまりおすすめできません。

ちなみに、細胞はセルバンカーには溶けませんし、溶かしたらしんじゃいます。

(無題) 削除/引用
No.4588-3 - 2015/11/13 (金) 12:34:36 - 独り言
いきなり液体窒素保存はやってはいけないことの一つ。細胞がまったく張り付いていないのであれば、死んでいるので、生き返ることは、現在の科学では無理でしょう。

少しでも張り付いている細胞が残っているのであれば、それが増えることを願って、数週間培養してみるしかない。

古典的には細胞を徐々に4、-20、-80度と段階的に冷やして、最後に液体窒素にいれるものであり、セルバンカーはいきなり-80度に入れても大丈夫という保存液です。

(無題) 削除/引用
No.4588-2 - 2015/11/13 (金) 12:18:49 - おお
けっこう厳しいと思います。凍結の仕方はちゃんとした本などをお読みください。通常は徐々に冷やしていくもんです。

細胞保存方法 削除/引用
No.4588-1 - 2015/11/13 (金) 12:06:22 - あああ
以前ここで RAW264.7 細胞の増殖・接着が悪いのでアドバイスを頂こうとスレを立てた者なのですが、最近新たに細胞を購入して増やしてから細胞をセルバンカーに溶かし、直接液体窒素に保存しました。

最初に増やしてる段階ではいきいきしていたのですが、再び液窒から起こした細胞は接着も増殖も悪くなってしまいました。

直接液体窒素に保存したことが原因で細胞がダメになってしまったのでしょうか?

普通は、-80℃に 24 h 保存してからその後に液体窒素に保存すべきだとネット上でみました。

細胞表面が傷ついても見えます。ここから細胞を復活させることはできますでしょうか?

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