Bio Technical フォーラム

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96ウエルプレート、384ウエルプレートへの細胞播種 トピック削除
No.4583-TOPIC - 2015/11/12 (木) 11:20:28 - かわ
皆様、いつも勉強させてもらっています。

最近、創薬のための細胞構築を行っております。大変楽しい実験でそれは良いのですが、96ウエルプレートや384プレートに細胞を均一に播種することが再現性良くできなくて困っています。縦横に叩いたりしますが、なかなか難しいです。

細胞が不均一に播種されているとアッセイの結果に大きく影響しますので、なんとかしなくてはいけないのですが、皆様お知恵を拝借できませんでしょうか?
 
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(無題) 削除/引用
No.4583-3 - 2015/11/12 (木) 12:06:06 - 不叶姉妹
[細胞を均一にまくには?]
http://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech/biotechforum.cgi?mode=view;Code=2078
[細胞が均一に分布しません]
http://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech2/biotechforum.cgi?mode=view;Code=1291
他にもあったような気が

個人的には、24well以上の大きさの場合インキュベーターに入れてからXY方向に数回振る。
96wellの場合はクリーンベンチ上でwellの中央部に細胞懸濁液を上からぽたぽたと落とすようにして入れ(壁面にチップの先が触れないようにする)、10分以上静置して細胞が完全に沈んだ頃に揺らさないようにしてインキュベーターまで持って行く。
48well, 384wellは使ったことがないのでわからない。

小さいwellの場合、メニスカスで周縁部の方がvolumeが多くなる影響が無視できなくなって中央部の細胞密度が低下しがちだから培地の量を倍くらいに増やすという方法もどこかで推奨されていた。ただ、とくに播きはじめは培地の量を増やしたくないこともあるのでその場合は上記の方法がいいと思う。

(無題) 削除/引用
No.4583-2 - 2015/11/12 (木) 11:43:40 - 海外留学2年目
アイデアは特に持ち合わせておりませんが、もしかしたら具体的にどのように播種されているのか記載されるとコメントがつきやすいかもしれません。

マルチピペッターでやられているのか、一wellずつまいているのか。
あとはvolumeも結構決定因子だったりするかもしれません。

96ウエルプレート、384ウエルプレートへの細胞播種 削除/引用
No.4583-1 - 2015/11/12 (木) 11:20:28 - かわ
皆様、いつも勉強させてもらっています。

最近、創薬のための細胞構築を行っております。大変楽しい実験でそれは良いのですが、96ウエルプレートや384プレートに細胞を均一に播種することが再現性良くできなくて困っています。縦横に叩いたりしますが、なかなか難しいです。

細胞が不均一に播種されているとアッセイの結果に大きく影響しますので、なんとかしなくてはいけないのですが、皆様お知恵を拝借できませんでしょうか?

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