Bio Technical フォーラム

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qPCR Ct value トピック削除
No.4576-TOPIC - 2015/11/11 (水) 05:25:44 - おお
皆さんのRT qPCRでinternal controlなど比較的多いサンプルはどれくらいのサイクルで立ち上がってきて、どれくらいのサイクルでamplyficationが飽和しますか?

inputのRNA、cDNAの量を添えて教えていただければ幸いです。
 
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(無題) 削除/引用
No.4576-5 - 2015/11/14 (土) 13:49:35 - おお
ふみさんありがとうございました。

hanaさんのだいたい1/10の系とおもわれますが、そう見るとだいたい同じところにきているようですね。

8.5は数字だけでちっとびっくりしましたが、18Sなら納得です。

(無題) 削除/引用
No.4576-4 - 2015/11/14 (土) 12:40:01 - ふみ
#1
RT  RNA : 1ug/20uL → 1/10希釈
PCR  cDNA : 2uL/20uL (0.2uL/20uL相当)
internal contol検出サイクル(Ct値):17

#2
RT  RNA : 1ug/20uL → 1/4希釈
PCR  cDNA : 2uL/20uL (0.5uL/20uL相当)
internal contol検出サイクル(Ct値):18

#3
RT  RNA : 1ug/20uL → 1/4希釈
PCR  cDNA : 2uL/20uL (0.5uL/20uL相当)
internal contol検出サイクル(Ct値):8.5

こんな感じです。
#1, #2, #3で、RT酵素, PCR mix, 機械の全部が共通ではありません。
Ct valueが8.5サイクルだったのは18S rRNAです。

(無題) 削除/引用
No.4576-3 - 2015/11/13 (金) 14:02:55 - おお
わ、ありがとうございました。 100ng 相当で12cycleで立ち上がってくるのですね。

(無題) 削除/引用
No.4576-2 - 2015/11/13 (金) 13:58:59 - hana

RT  RNA : 1ug/20uL
PCR  cDNA : 2uL/20uL
cycle 立ち上がり : 12
    飽和 : 22

今使っている機械だとこんな感じです。

qPCR Ct value 削除/引用
No.4576-1 - 2015/11/11 (水) 05:25:44 - おお
皆さんのRT qPCRでinternal controlなど比較的多いサンプルはどれくらいのサイクルで立ち上がってきて、どれくらいのサイクルでamplyficationが飽和しますか?

inputのRNA、cDNAの量を添えて教えていただければ幸いです。

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