BioTechnicalフォーラム [プレートの不良でトランスフェクションで細胞が剥がれる]

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(無題)

No.4556-5 - 2015/11/05 (木) 12:08:43 - AP

幾何的な法則性があり、メーカーが違っても同じことが（頻度はおいといて）起こるということから、何かしらの手癖が原因である可能性を否定出来ないと思います。
例えば、あえてプレートを上下逆さまに（数字やアルファベットが逆さまになる向きで）使ってみるとか。そしたら剥がれるのが上半分、右半分になるでしょうか？

こういう小話もあります。
患者「先生、私はコーヒーを飲むと必ず目が痛くなって困っているのですが」
医者「それは聞いたことがない症状です。試しにここでこのコーヒーを飲んでみてくれませんか」
患者「痛っ、痛たたっ。目が、目がー」
医者「わかりました。あなた、コーヒーを飲むときはカップにスプーンを入れたままにしないでください」

(無題)

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No.4556-4 - 2015/11/05 (木) 11:57:44 - み

下半分とか左半分とか仰っていますが、
その剥がれる領域は毎回同じですか？
同じならプレートを上下または左右に置き方を変えてみて、それで剥がれる領域が変化するかで、プレートの方が悪いのか？incubatorなどあなたのラボの問題なのかの区別ができませんか？

ちなみに、そのような問題は聞いたことが無い。

(無題)

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No.4556-3 - 2015/11/05 (木) 11:24:44 - 独り言

初めて聞きました。

(無題)

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No.4556-2 - 2015/11/05 (木) 11:17:15 - たていす

CO2インキュベータを適切に管理していますか？
例えば、
水は適切な量入っているか。
炭酸ガスの撹拌は適切に行われているか。
過度に開け閉めしていないか。
などです。

プレートの不良でトランスフェクションで細胞が剥がれる

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No.4556-1 - 2015/11/05 (木) 11:07:02 - 結構悩んでいます

tissue-culture-treated multi-well plate に細胞を撒き、翌日そこにDNA-transfection reagent mixtureを添加してtransfectionをするという、普通の実験をしています。
時々、プレートの最下段や最左段のwellで、最下段だとwellの下半分の細胞が完全に剥がれてしまう（上半分はしっかり細胞が接着しているのに）とか。最左段のwellでは左半分が剥がれてしまうとか、ということがたまに起こります。（実際に剥がれる領域の形は色々ですが、境界ははっきりしています。）とにかく端っこに起き易いので、tissue-culture treatmentのムラだと思うのですが
メーカーに文句をいうと、残っているプレートを持っていって、「Lotの品質管理用に使用している細胞を培養したが、問題なく培養できたので品質はOKだ」といいます。たぶんただ細胞培養しただけでは分からなく、しかもそういう品質不良なプレートの頻度が少ないのだと思います。
Falconで時々おこり、Nuncに変更したのですが、やはり同じ問題がまれですが起こります。
とにかく
＃１比較的まれなので、皆さんにこのような経験があるかお聞きしたいです。

＃２　Multi-well plateでのtransfectionは日常的実験なので、メーカーは品質管理において、細胞培養だけでなく、transfectionしても接着性が変わらない程度に、tissue-culture treatmentを強くする（できるかどうかわかりませんが）とか、品質管理の評価にtransfection耐性というのを加えるとか、というようなことが必要ではないかと思いますが、いかがでしょうか？？

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