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(無題) 削除/引用 No.4518-3 - 2015/10/25 (日) 00:23:39 - +PLL サンショウウオ様、ありがとうございます。 低濃度でオーバーナイトなんですね。了解です、その方法で行ってみます！ 実は昨日５日ほど前にGelatinコートガラス上にまいてそのまま放置していた293Tを染めてみましたら、前回とは違い、全然剥がれることなく封入まで行けました。もちろんかなりコンフレントになっていましたのでよくはないと思いますが..密度が大事なのかなと思った次第です。 > 　トリプシンで分解されないタンパクであれば、PLLコートガラス上にまきなおしてもいいとおもいます。 ガラス上でも普通にトランスフェクションしてもいいんですね。。なぜあたしの細胞死んでしまったんだろう・・ ですが、勇気をもらえました。ありがとうございます！！

SigmaのPLLであれば 削除/引用 No.4518-2 - 2015/10/24 (土) 22:26:56 - サンショウウオ うちでは節約のため、 滅菌済みPBSにPLLを五十倍希釈してガラスベースディッシュに適量加え、オーバーナイトすることでPLLコートしています。 　使い回しはコンタミとかが怖いので、低濃度＆オーバーナイトインキュベートでコーティングしてHEKとかくっつけてます。 　トリプシンで分解されないタンパクであれば、PLLコートガラス上にまきなおしてもいいとおもいます。 　トリプシンでタグなどが分解されるタンパクであれば、 　PLLコートガラス上に細胞播種して20h以上前培養 　トランスフェクションする 　トランスフェクション後細胞を観察する と言った流れでやってます。

ポリリシンコート基材の再利用 削除/引用 No.4518-1 - 2015/10/23 (金) 15:55:27 - PLL 2点、お聞きしたいことがあります。よろしくお願いします。 1. 隣の研究室よりポリLリシン溶液（シグマ）を２ml貰いました。これをガラスのコートに用いて、その上に一過性にトランスフェクトした細胞を撒きたいです。 うまくいきそうでしたら、自分の研究室でオーダーします。 24-well plateにガラスを入れて、それをコートするだけなら各well 200-300 ulでいいと思うのですが、コートし終えたポリリシンは再利用できるのでしょうか？ 2. トランスフェクトした細胞を上記のように蒔き直すのがいいのか、それともガラスの上に蒔いた細胞にトランスフェクトしたほうがいいのか、どちらがオススメですか？これまで後者で行っていましたが、細胞が結構剥がれてしまうのと、上司には前者の方法でやったほうがいいんじゃないか？とご教示いただきました。なぜ前者のほうがいいのか理解できていません。 皆様はどうされていますでしょうか？

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