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(無題) 削除/引用 No.4495-3 - 2015/10/15 (木) 13:46:12 - おお 細胞数が私も最初に浮かびますけど。培養初めてたとえば72時間後に回収すれば、最初の細胞数から増殖してきた細胞数にいたるまでの過程で蓄積したものになりますから、ちょっと比較しづらいですね。 細胞数がある程度になってから、培地を交換して数時間後に回収して分泌したその蛋白が検出可能ならもう少し細胞数ベースで比較しやすいと思います。

(無題) 削除/引用 No.4495-2 - 2015/10/15 (木) 13:24:59 - ccc 細胞数で補正してはいけないのでしょうか？

培養上清に分泌される量の比較（増殖に差がある細胞間で） 削除/引用 No.4495-1 - 2015/10/15 (木) 13:18:26 - デザイン いつも拝見させていただき、学ぶことが大変多く勉強になっております。 今私はある遺伝子Xのノックアウト293T株とその親293T細胞間での細胞の表現系解析をしています。 タンパク質Xはタンパク質Aの細胞外分泌を抑制する働きがあります。実際westrenで細胞内タンパク質Aがノックアウト細胞で減少していることが確認されました。タンパク質AのmRNAはXノックアウト如何に関わらず、一緒でした。 そこで当然Xノックアウト293T細胞でタンパク質Aの細胞外分泌をみたいのですが、そもそもXノックアウト細胞ややや細胞の増殖が遅いです。 たとえば、day 0に1x10E6 cellsをまいて、day 5に培養上清を回収するとなると、エンドポイントのday 5ではそもそも細胞の絶対数がWTの方で多く、KOの方では少ないです。 細胞内タンパク質のwesternの場合にはloading controlでGAPDHやらActinやらで補正できますが、細胞外に分布されたものとなるとどうやって解釈といいますか、データを取り扱ったらよいのか自信がありません。 細胞外に分泌されるようなloading controlがあればいいんでしょうけど・・

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