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(無題) 削除/引用 No.4429-8 - 2015/09/23 (水) 23:37:11 - い 試薬の活性を疑っておられるようですが自分の腕に問題はないのですか？

(無題) 削除/引用 No.4429-7 - 2015/09/22 (火) 02:26:16 - k ありがとうございます。ルシフェラーゼアッセイや他の細胞を用いることで活性を確認することはできますが（試薬も全て手元にはありますが…）、ボスはあくまでも同実験においてE2がWorkすることを確認したいようです。したがって単純にmRNAやタンパクレベルでの誘導効果を見たいと思っています。他の線維芽細胞ですが、ごく少数ながらFibronectinなどの誘導報告があるので、地道に確認してみたいと思います。

(無題) 削除/引用 No.4429-6 - 2015/09/18 (金) 07:47:37 - おお nuclear receptor typeのレセプターを介した遺伝子なら、プロモーターのキャラクタライズされている遺伝子からさがすのがいいかとおもいますけど、GPER (GPR30)という膜結合型G protein-coupled receptorもありますねぇ。。。 両者のレセプターの発現は見ていますか? nuclear receptor typeであればそのコンセンサスをもつルシフェラーゼなどのレポーターgeneをtransfectionしてやればEstradiolが働いているかはわかるんじゃないかな。 GPER (GPR30)のほうは活性化を見れる方法があればその方法で検出してもいいかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.4429-5 - 2015/09/18 (金) 07:46:33 - k ご指摘ありがとうございます。新品を使用しておりますが、ボスの指示でどうしてもポジコンが必要になりましたので悩んでおります。よろしくお願い致します。

(無題) 削除/引用 No.4429-4 - 2015/09/18 (金) 07:42:56 - え Estradiolなんて高価ではないから新品買って、新たにDMSOなどに希釈すれば良いのでは？

(無題) 削除/引用 No.4429-3 - 2015/09/18 (金) 07:26:46 - k 検索すると多数の既報（Estradiolで線維芽細胞を刺激した論文）が出てきますが、いずれのタンパクor遺伝子が最も代表的な（ポジコンになりうる）ものかがわかりませんでした。複数の論文で繰り返し誘導されているOutputがあればよいのですが、今のところまだ見つけられていません。ご助力をいただけると大変助かります。

(無題) 削除/引用 No.4429-2 - 2015/09/18 (金) 06:47:52 - おお ご自身で調べられませんか、、、まあちょっと時間があればわたしもしらべることができますが、、、

線維芽細胞におけるEstradiol刺激のポジコン 削除/引用 No.4429-1 - 2015/09/18 (金) 05:35:22 - k 滑膜線維芽細胞をEstradiolで刺激し、目的の遺伝子が誘導されるかどうかを調べています。結果、無反応でしたが、Positive controlの確認が不十分であるため、信憑性（使用したEstradiolの活性）に不安があります。既報によると、滑膜線維芽細胞をEstradiolで刺激するとIL-1a,CCL13,MMP-2,OPGが誘導されるとのことでしたが、これらはほとんど誘導されませんでした（IL-1aのみ、ごくわずかに反応しました）。どの線維芽細胞でもかまいませんので、Estradiolで刺激した際に誘導される遺伝子で代表的なものを教えていただけませんでしょうか。よろしくお願い致します。 （他の細胞を用いればより容易に確認できるのでしょうが、ボスは線維芽細胞を用いてEstradiolの活性を確認することを望んでいます…。）

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