Bio Technical フォーラム

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細胞カウント トピック削除
No.4404-TOPIC - 2015/09/08 (火) 00:53:44 - 初心者
現在HuT78という、浮遊細胞を使用しています。
この細胞は、増殖の際にコロニーを作りながら増えていくようです。
コロニーはピペッティングでもなかなか壊れにくい塊です。

テュルク液を用いて染色し、計算盤を用いて細胞数をカウントしていますが、このコロニーのせいか、カウントして得られた数字と、培養フラスコ内の細胞数の印象が一致しません。
(カウントで得られた細胞数より、ずっと多い細胞数がフラスコ内にあるように感じています)
このような場合、より的確に細胞数をカウントする方法はあるのでしょうか?

何かご存知でしたら、是非ご教授ください。
 
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(無題) 削除/引用
No.4404-4 - 2015/09/09 (水) 02:13:52 - おお
そうです。カルシウムの濃度をおとして、細胞間の接着をゆるめれるかも知れませんから。PBS-EDTAを代わりに使う手もあります。まあtrypsinまで必要かどうかはわかりませんけど。

(無題) 削除/引用
No.4404-3 - 2015/09/09 (水) 01:10:58 - 初心者
すみません、チュルクではなく、トリパンブルーでの染色の書き間違いでした。
PBSで洗うというのは、細胞を回収して、一部を洗って、カウントするということでしょうか?
よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用
No.4404-2 - 2015/09/08 (火) 03:01:12 - おお
チュルク液でないといけないでしょうか、、、チュルク液を使う意味がいまいちわかりません。
あとPBSで一度洗えばどうでしょうか。

細胞カウント 削除/引用
No.4404-1 - 2015/09/08 (火) 00:53:44 - 初心者
現在HuT78という、浮遊細胞を使用しています。
この細胞は、増殖の際にコロニーを作りながら増えていくようです。
コロニーはピペッティングでもなかなか壊れにくい塊です。

テュルク液を用いて染色し、計算盤を用いて細胞数をカウントしていますが、このコロニーのせいか、カウントして得られた数字と、培養フラスコ内の細胞数の印象が一致しません。
(カウントで得られた細胞数より、ずっと多い細胞数がフラスコ内にあるように感じています)
このような場合、より的確に細胞数をカウントする方法はあるのでしょうか?

何かご存知でしたら、是非ご教授ください。

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