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細胞増殖に関する実験。 トピック削除
No.4378-TOPIC - 2015/08/30 (日) 20:00:12 - はる
ある遺伝子が過剰発現している際に、神経細胞数が通常発現よりも少なくなる。という事が遺伝子過剰発現細胞株を用いた実験を行い、分かったのですが、そこから何が起こって細胞数が少なくなっているのかを調べるためにウエスタンを実施しようと考えています。その際に上長から、ウエスタンに用いる抗体として、p53,p27,p21,caspase3,9の中から適当な抗体を選んで欲しいと言われました。この細胞数が低下している原因としてアポトーシスを考えていたのですが、別途の実験でアポトーシスの可能性は低い事が分かりました。なのでカスパーゼ系の抗体を使うのは、、、と考えております。残りはp53,21,27なのですが、どの抗体をチョイスすれば良いのか案が浮かびません。皆様のアドバイスを頂きたいです。
 
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No.4378-7 - 2015/08/30 (日) 23:50:04 - おお
どこの会社だったか同じカテゴリーの抗体を少量ずつセットにして、通常の抗体1個かう値段とさほど変わらない値段で売ってたけどそういうので3っつ同時に手に入れるとかすればどう?

あと示された遺伝子だとノックアウトマウスなどできていると思うから、それで脳で何が起こっているか報告がないかな?

あるいは抗体で見る前にRTPCRをやるとか(もちろんpost translationのレギュレーションも関与してくる可能性があるのでそれだけで蛋白の増減はいえませんけど)。

(無題) 削除/引用
No.4378-6 - 2015/08/30 (日) 21:34:56 - う
Cyclin

(無題) 削除/引用
No.4378-5 - 2015/08/30 (日) 21:33:15 - う
CDK

(無題) 削除/引用
No.4378-4 - 2015/08/30 (日) 21:03:25 - はる
ご回答有難うございます。
p53,27,21の抗体では無意味という事でしょうか?

(無題) 削除/引用
No.4378-3 - 2015/08/30 (日) 20:21:19 - gg
Ki67, phospho-histone H3

BrdU (ICC)

(無題) 削除/引用
No.4378-2 - 2015/08/30 (日) 20:11:22 - 横
PCNA

細胞増殖に関する実験。 削除/引用
No.4378-1 - 2015/08/30 (日) 20:00:12 - はる
ある遺伝子が過剰発現している際に、神経細胞数が通常発現よりも少なくなる。という事が遺伝子過剰発現細胞株を用いた実験を行い、分かったのですが、そこから何が起こって細胞数が少なくなっているのかを調べるためにウエスタンを実施しようと考えています。その際に上長から、ウエスタンに用いる抗体として、p53,p27,p21,caspase3,9の中から適当な抗体を選んで欲しいと言われました。この細胞数が低下している原因としてアポトーシスを考えていたのですが、別途の実験でアポトーシスの可能性は低い事が分かりました。なのでカスパーゼ系の抗体を使うのは、、、と考えております。残りはp53,21,27なのですが、どの抗体をチョイスすれば良いのか案が浮かびません。皆様のアドバイスを頂きたいです。

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