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(無題) 削除/引用 No.4362-3 - 2015/08/24 (月) 15:59:41 - 774 vectorのsequenceは公開されているでしょうから、 いくつかコロニーを拾って、prep後に制限酵素処理でチェックして３種類とればいいのでは？ もとのkitでは混合比は最適化してあるでしょうけど、条件検討すれば大丈夫な気がします。

(無題) 削除/引用 No.4362-2 - 2015/08/23 (日) 15:24:29 - おお みっつ混ざってたほうがtransfectionには楽ですから、、、わざと増やせないようにしているかは知りませんが、そう言うことを想定してませんね。 どうしてもというなら、もしサイズが違うなら電気えいどうして切り出してそれぞれのプラスミドにわけるとか。 バラで取り扱ってないとしたら、なかなか大胆ですね。

レンチウイルス作成時のパッケージングプラスミドについて 削除/引用 No.4362-1 - 2015/08/23 (日) 14:32:07 - レンチ レンチウイルス実験を立ち上げました。 ２点質問があります。お手すきの際に教えていただけますと幸いです。 SBIというところからlentivirus用のplasmidを購入し、その付属としてpPACKH1 plasmid mixというものを受け取りました。 ttps://www.systembio.com/lentiviral-technology/delivery-systems/ppack/technical-details pPACKH1 plasmid mixは３つの独立したプラスミドの混合物で、それぞれgag, pol, envと、revとvsv-gをコードしています。 それぞれのプラスミドにはアンピシリン耐性遺伝子は搭載されていますので、Ampでのセレクションでプラスミドのプレップはできそうではあるのですが、それぞれをクローニングしなくても大丈夫なのかと不安です。どうしたら良いでしょうか？３つのプラスミドをクローニングするとなると結構手間で、わざと増やさせないようにしているのかと思っています。どうしたらよいでしょうか？ ふたつめは、pPACKH1 plasmid mixの残量が少なくなったため同僚から別のメーカーから売られている個々のpackaging plasmidsを使わせてもらうことになりそうです。 この時、自分のインサートが入った目的のプラスミドの他に、vsv-Gのプラスミド、それからgag, pol, envのプラスミドのトータル３つを遺伝子導入することになりますが、その際のプラスミドごとの比率にオススメはありますか？私は今の所1 :1:1で行っていますが、あまり観戦効率がいいとは言えません。ウイルスがそもそもできていないという可能性は完全には排除はできませんが・・

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