Dynabeads ProteinGを使って目的のタンパク質の免疫沈降はできていたのですが、
抗体をビーズに架橋させるとタンパク質のバンドがゲル上でほとんど確認できなくなってしまいます。
抗体架橋反応の経験がある方で何かご助言頂けると幸いです。
※架橋反応は0.2MのトリエタノールアミンにDMPを最終濃度20mMになるよう添加し、室温で30分ローテーションしています。
反応停止には50mM トリス(pH7.5)を加えています。
架橋されていないであろう抗体の除去には0.1M グリシン(pH3.0)で洗浄しています。 |
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