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(無題) 削除/引用 No.4292-6 - 2015/07/29 (水) 21:07:01 - 免染 >おおさん お返事が遅れてしまいました。 リンクどうもありがとうございました。 と同時に自分の調査能力の無さを思い知らされました・・・ 早速やってみたいと思います。 重ねて御礼申し上げます。

(無題) 削除/引用 No.4292-5 - 2015/07/24 (金) 13:44:14 - おお http://cshprotocols.cshlp.org/content/2008/1/pdb.prot4820.full

(無題) 削除/引用 No.4292-4 - 2015/07/24 (金) 13:34:03 - おお http://www.biotechniques.com/multimedia/archive/00044/Whole_Mount_Immunohi_44203a.pdf Methanol is a popular second choice of fixative when optimizing whole mount procedures.

(無題) 削除/引用 No.4292-3 - 2015/07/24 (金) 11:02:11 - 免染 >おおさん whole-mountではすでにPFAで失敗しています。 ICCでPFAが不適か確かめるのはごもっともなのですが、 結局whole-mountで染めなければならないので、 どちらかというとwhole-mountでメタノール固定等で染めるというのは アリなのかという意図で質問しました。 対象が表層というか臓器表面の細胞なので ある意味ICCと同じように考えてもいいのではと 思い、メタノールやアセトンなどでwhole-mountを やったことがある方がいないかと思った次第です。

(無題) 削除/引用 No.4292-2 - 2015/07/24 (金) 09:06:50 - おお ICCでPFA固定してみたらどうよ。それで見えなかったら抗体が固定方法を選ぶってことですよね

ICCで染まるけどIHCやwhole-mount IFで染まらない抗体 削除/引用 No.4292-1 - 2015/07/24 (金) 08:21:06 - 免染 あるリン酸化抗体をwhole-mountの免染をしたいと考えています。 その抗体はICCでは使えるけどIHCではうまく染まらないと言われている抗体です。 対象組織はマウス胎生期のいくつかの臓器の表層付近で 4%PFA/Triton-PBSで4℃4時間で固定しています。 表層組織なので固定が不十分になり、脱リン酸化等でシグナルが 検出できないというのは考えにくいと思われます。 ICCで使われる場合メタノールやアセトンで固定をする抗体なので PFAではダメなのかもしれないと思っています。 Tritonがだめという可能性もあるかもしれませんが、他の核タンパクは 問題なく染まっています。 ホールマウントでリン酸化抗体で染めたことや メタノール固定で染めたことのある方が いらっしゃいましたら教えていただければと思います。

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