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LC-MS/MSでのタンパク質同定に影響しないプロテアーゼ阻害剤 トピック削除
No.4269-TOPIC - 2015/07/14 (火) 21:39:08 - たたみ
LC-MS/MSによるタンパク質同定の前処理にプロテアーゼ阻害剤を使いたいと思っています。しかし、市販の動物向けプロテアーゼ阻害剤カクテルの多くは、アプロチニンという牛由来の酵素を含んでいます。MS用に売り出されているカクテルにも入っています。この場合、阻害剤カクテルに含まれる酵素は、その後のLC-MS/MSによる分析に影響しないのでしょうか。
 
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(無題) 削除/引用
No.4269-4 - 2015/07/16 (木) 10:04:58 - cDNA
トリプシンの阻害剤が入っているとMS分析前のトリプシン消化に影響を与えるのでは?という質問でしょうか?

SDS-PAGE後にトリプシン消化なら、影響しないでしょう。
SDS-PAGE前であっても、タンパク質を抽出するバッファー中の阻害剤濃度が重要なので、恐らく、トリプシン消化するときまでその阻害剤濃度を維持しないような操作、希釈、分画、バッファー交換等、行われていると思いますが、どうでしょうか?

(無題) 削除/引用
No.4269-3 - 2015/07/15 (水) 09:20:17 - たていす
>アプロチニンという牛由来の酵素を含んでいます。
アプロチニンという牛由来の酵素阻害ペプチドを含んでいます。

(無題) 削除/引用
No.4269-2 - 2015/07/14 (火) 21:58:53 - おお
どの様な実験を組んでいるかわからないので何とも言い様がないですけど、、、

LC-MS/MSでのタンパク質同定に影響しないプロテアーゼ阻害剤 削除/引用
No.4269-1 - 2015/07/14 (火) 21:39:08 - たたみ
LC-MS/MSによるタンパク質同定の前処理にプロテアーゼ阻害剤を使いたいと思っています。しかし、市販の動物向けプロテアーゼ阻害剤カクテルの多くは、アプロチニンという牛由来の酵素を含んでいます。MS用に売り出されているカクテルにも入っています。この場合、阻害剤カクテルに含まれる酵素は、その後のLC-MS/MSによる分析に影響しないのでしょうか。

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