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(無題) 削除/引用 No.4266-4 - 2015/07/14 (火) 13:34:18 - AP >このような方法は可能なのでしょうか。 ていうか、PCRが世に出ていなかった、四半世紀以上前から普通にやられていたことですが。さすがにｓCDSの頭ジャストから尻尾の先まできれいにタグとフレームを合わせて入れる、みたいなことをやるのはPCRなしには難しいです。しかし、多くの場合、完全長でなくて良い（CDSの途中からタグにつなぐ）とか、余計なコドンがはさまってても良い（CDS前後のUTRの配列が少々残る）ので、制限酵素、修飾酵素を駆使すれば大抵のことはできます。

(無題) 削除/引用 No.4266-3 - 2015/07/14 (火) 11:47:41 - おお ストップコドンなくフレームを合わせれることができれば、昔はよくやられた方法だと思います。このてのプラスミドはa, b, cとか1, 2, 3とか番号がついたのがあって、multicloning siteの酵素認識配列が一塩基づつづれているプラスミドがあってどれかにうまくフレームがあうようになってたりします。

(無題) 削除/引用 No.4266-2 - 2015/07/14 (火) 10:29:34 - sp ごくごく普通すぎる方法です。 1. GSTと融合する際、コドンがずれない 2. 開始コドン、終止コドンに気をつける（場合によってはPCRが必要） 3. 適した制限酵素がなければ、突出末端の一部または全部を埋めてコドンを合わせる 最低限、以上のことを考えれば問題なくできます。 それより、ラボで聞ける人はいないのか？

ベクターの乗り換えについて 削除/引用 No.4266-1 - 2015/07/14 (火) 10:18:07 - tora いつもお世話になっています。 現在あるタンパクの発現をしようとしているのですが、pGEMでクローニングした遺伝子をpGEXに移し替えようと思っています。 この過程において、なるべくPCRを行いたくないのでpGEMから制限酵素で遺伝子を切り出してpGEXに挿入しようと考えています。 このような方法は可能なのでしょうか。アドバイスお願いします。

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