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(無題) 削除/引用 No.4189-7 - 2015/06/18 (木) 09:05:25 - サバンナ なるほど！ アドバイスありがとうございます！ 私だけではないのですね。少しホッとしました さっそく試してみます！

(無題) 削除/引用 No.4189-6 - 2015/06/18 (木) 08:53:04 - おお 30サイクルはいらないんじゃないかなぁとわたしもおもうけど。アンーリングと伸長反応の68度は72度ぐらいまで上げる人もいますね。

(無題) 削除/引用 No.4189-5 - 2015/06/18 (木) 08:49:24 - 独り言 ３０サイクル以上でプラスミド一周するようなPCRすると、プライマー配列が２−３個タンデムに入ってしまうことが私もみまわれたことがあります。 ２０サイクル、せめて２５サイクルでPCRすると解決しました。

(無題) 削除/引用 No.4189-4 - 2015/06/18 (木) 01:57:08 - サバンナ 条件を書いていませんでしたすみません 2ステップで30サイクル行っています �@94℃、2min �A98℃、10sec �B68℃、2.6min �Cgo to�A 30 cycle �D4℃

(無題) 削除/引用 No.4189-3 - 2015/06/17 (水) 23:11:31 - おお プライまーの末端にプライまーがミスアニーリングするんでしょうかねぇ。。。どういう条件でPCRしているかわかりませんが、もうちょっと厳しい条件にできませんかねぇ。。。 それか酵素かえるか。。。

(無題) 削除/引用 No.4189-2 - 2015/06/17 (水) 22:41:31 - 独り言 PCRのサイクル数が３０回以上だったりしませんか？

quick change法におけるプライマー配列の重複挿入 削除/引用 No.4189-1 - 2015/06/17 (水) 19:04:57 - サバンナ はじめまして 単純な質問でしたらすみません quick change法を用いて大腸菌組換えタンパク質の変異体のベクターを作製しています。 PCRは成功するのですが、シーケンスの結果、使用したプライマーの配列が2~4個連続して挿入されてしまうことが何度もあり困っています。この原因について教えていただけないでしょうか？ プライマーのTmは65℃程度、35bpでユーロフィン社製のものを ポリメラーゼはKODplus neoを使用しています また、ベクターのは約5000bpです。 よろしくお願い致します

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