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(無題) 削除/引用 No.4159-3 - 2015/06/08 (月) 23:31:58 - ハテナ mon様 ご回答ありがとうございます。 In-Fusionのインサートとベクターがつながる原理が組み換えによるものだと思い込んでおりました。 ご教示いただいた後、3'-5' exonuclease活性について調べ、一本鎖同士がアニールして連結すること、3'-5'exonuclease活性でどのように削れるかをあわせて考えましたところ、ベクター末端が3'突出の場合など突出部分を15塩基に含めてしまうと、ベクターとインサートで相同配列を作れる塩基数が15塩基より少なくなってしまうことなどが想像でき、理解することができました。 3'-5' exonuclease活性についても勉強になり、大変ありがたく存じます。 詳しく親切にご回答いただき本当にありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.4159-2 - 2015/06/05 (金) 06:39:18 - mon In-FusionシステムはワクシニアウィルスのDNA polymreseの3'-5' exonuclease活性を利用して、ベクターDNA断片・インサートDNA断片の末端の3'側から２本鎖の片側を削り一部領域を一本鎖にすることを利用しています。その末端一本鎖同士がアニールして、大腸菌内で修復・連結されます。 なお、一本鎖にされる長さは厳密に制御されているわけではありません。 （活性を弱めた）T4 DNA polymeaseでも同様なことが出来ます。 3'-5' exonuclease活性でどのように削れるか考えれば、理解出来ると思います。

InFusion、ベクター突出末端の場合のプライマー設計につきまして 削除/引用 No.4159-1 - 2015/06/05 (金) 02:46:33 - ハテナ 日頃よりお世話になっております。 In-Fusionシステムのインサートプライマー設計についての質問です。 ベクター末端が5'突出の場合と3'突出の場合とで、リコンビナントを作らせるための15塩基に突出部分の配列を含めるかどうかが変わってくる、という原理が理解できません。 ベクター末端3'突出の場合はリコンビナントベクターでは突出部分は削られることになると理解しています。 ベクター末端5'突出の場合は突出部分は残ると理解していますが、突出部分がどう残るのかがいまいちよく理解できません。 どうか教えていただけませんでしょうか。 どうぞよろしくお願いいたします。

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