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(無題) 削除/引用 No.4149-11 - 2015/06/07 (日) 13:09:43 - おお 400kDaでも大丈夫だと思いますけど。わたしはミニゲルでそれくらいのものを分離してました。Tris-Glycine系のバッファーでしたけど、Tris-acetate系なら高分子の分離がいいようですし、バッファー系などの選択もoptionとして考えればいいと思いますよ。

(無題) 削除/引用 No.4149-10 - 2015/06/07 (日) 12:51:15 - エンタツ ちなみに縦の長さが7cmのゲル(Bio-rad社ミニプロティアン Tetra セル)でもグラジエントゲルを使えば400kDaを分離することはできますでしょうか？ それとも当初考えていた16cmのゲル(Bio-rad社プロティアン II xi セル )で泳動する装置じゃないとグラジエントゲルを使っても分離できないですかね？ メーカーの取説には書いていないようなのでゲルの大きさ的に問題ありますかね？

(無題) 削除/引用 No.4149-9 - 2015/06/07 (日) 12:28:03 - エンタツ 皆さんありがとうございます。 均一ゲルだと、300kDaを分離しようと思うとゲルが破れやすいとのことなのでアドバイスにあったグラジエントゲルでやってみようかと思います。

(無題) 削除/引用 No.4149-8 - 2015/06/03 (水) 10:21:23 - sai 0.5%程度のアガロースを添加すれば、3%アクリルアミドゲルもつくれますが、 柔らかすぎて熟練者向け。 検出したいのが300kDaだけなのか、300kDaとさらに近い分子量を 分けたいのかによって、指摘ゲル濃度を決めるのが良いのでは。

(無題) 削除/引用 No.4149-7 - 2015/06/03 (水) 08:43:12 - サリーちゃんのパパ はじめて実験されるようなので、やわらかい均一ゲルよりは、グラジエントゲルの方が破れずにうまくいくでしょう。 お金があれば、Simple Westernを買ってもらうというのもありかも。それならここで懸念している失敗はないので。

(無題) 削除/引用 No.4149-6 - 2015/06/03 (水) 08:32:56 - 独り言 私も4-20%ぐらいのグラジェントをお勧めする。 4-20%のグラジェントならマーカー的には500kDaぐらいの位置ののまでちゃんと分離はできていた。 どちらにしても４％ゲルはフニャフニャしすぎだと思う。

(無題) 削除/引用 No.4149-5 - 2015/06/03 (水) 07:45:20 - しろ 確かに4%ゲルですととてもやわらかいので下手しますと破れてしまうのが注意ですね。4−15%のレディゲルを使うのも手だと思います。

(無題) 削除/引用 No.4149-4 - 2015/06/03 (水) 01:53:23 - １q２w３え４r５t６y７う 8パーゲルで50kくらいのマーカーがゲルの一番下くらいにくるまで泳動すれば十分いい感じで分離できる。６パーはかなりの玄人向け。４パーゲル扱えるのは神レベルていうか人間には無理。

(無題) 削除/引用 No.4149-3 - 2015/06/02 (火) 11:34:24 - おお >大抵の泳動槽で分離できるものでしょうか？ まあだいたいカバーできます。でも大きい方が分解能をかせげるので、いまみにゲルようしかなく、大きいのが欲しくなることはあります。

(無題) 削除/引用 No.4149-2 - 2015/06/02 (火) 11:31:19 - おお 電気えいどうのえいどうパターンとかはカタログとか見ればのってるでしょう。4%でもいいけどたぶん相当扱いなれてないとうまくいかないと思う。プレキャストならましかもしれませんけど。6%ぐらいが扱うときに極度に慎重にならずにできる最低限かなと思う。まあそれなりに高い位置に出るけど、どの程度の解像度がいるかにもよると思う。それでもちょっと下げたいなら5.5%とかかな。 せっかくだから4%にちょうせんというならそれはそれでいいですけど。

電気泳動槽(SDS-PAGE)の分子量限界 削除/引用 No.4149-1 - 2015/06/02 (火) 11:18:05 - エンタツ はじめまして、SDS-PAGEで300kDa付近のタンパク質を検出しようと考えているのですが、濃度を調節しさえすれば大抵の泳動槽で分離できるものでしょうか？(300kDaなら4%ぐらいでしょうか) まだ、泳動槽自体ないので、biorad社の「ミニプロティアン® Tetra セル 」を購入しようと考えています。

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