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(無題) 削除/引用 No.4139-6 - 2015/06/01 (月) 14:20:09 - おお ああ、バックグランドが高くって、蛋白があるところがブロッキング効果みたいなので抜けてることかもしれないってことですね。。。

(無題) 削除/引用 No.4139-5 - 2015/06/01 (月) 14:12:34 - たていす 白抜けのポジコンとして、一次抗体（と同種のIgG）を電気泳動にかけて、濃度依存性を確認するとよいです。 白抜けのバンドが見えるのは、抗原が濃すぎるからではないだろうと想像します。 膜がそもそも白のはずなのにTMB染色で白いバンドが見えると言うことは、バックグラウンドがそこそこ高いということではないかと思います。 そうすると、ブロッキングが足りないか、うまく発色しないので勢い過剰発色になっているのではないかと想像します。 白抜けしていることころには、あなたのサンプルに含まれる非特異的なタンパクがあり、そのタンパクで特別強くブロッキングされているからではないでしょうか？ 膜をCBBで染色すると、白抜けするところに大きなバンドがあったりしませんかね？

(無題) 削除/引用 No.4139-4 - 2015/06/01 (月) 12:21:18 - おお >[Re:3] ウエスタンさんは書きました : > WBでの白抜けですが、昔一度なったことがあります。 発色/発光基質はなんでしょうか。ケミルミではよくきく現象ですが、、、質問者はケミルミでないキットをお使いのようですし。ただ確かに強すぎたというのが原因かなとあまり根拠がなくおもってはいますけど。

WBでの白抜け 削除/引用 No.4139-3 - 2015/06/01 (月) 08:38:59 - ウエスタン WBでの白抜けですが、昔一度なったことがあります。 上司が即座にオーバードーズだといいました。 サンプル、１次、二次抗体を薄めたとのことですが、10倍、100倍、1000倍のオーダーでの希釈でしょうか？ 最近の２次抗体は感度がよいので、かなり希釈しないといけないのではないでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.4139-2 - 2015/05/31 (日) 14:25:26 - おお 経験がございませんので、、、どなたか経験がある方がいらっしゃるといいのですが、attoに直接聞いてみるのも手かとおもいました。 これ発色溶液につけてしんとうしておくわけですよね。なのでECLなどでおこる基質の枯渇では説明がつかないし、、、HRPのダメージかな。。。

ＷＢでの白抜け 削除/引用 No.4139-1 - 2015/05/31 (日) 12:38:07 - たろう いつもお世話になっています。 ウエスタンブロットを行っているのですが、どうしても目的の位置のバンドが白抜けしてしまいます。 発色はATTOのEzWestBlueを使っているのですが、化学発光じゃなくても白抜けするものなのでしょうか？ また、白抜けの原因は化学発光と同じと考えてよいのでしょうか？ ひとまずサンプル量、一次、二次抗体を薄めてみたのですが、白いバンドが出てしまい、困っています。 よろしくお願いします。

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