BioTechnicalフォーラム [希釈計算について]

希釈計算について

No.4117-TOPIC - 2015/05/22 (金) 15:36:43 - Paul

現在、培養細胞とtet onシステム、ドキシサイクリンを用いた実験をしようと考えています。そこで、ドキシサイクリンを培地に投与した際、何日間培養で目的遺伝子の発言がピークになるかを第一に見たいと考えています。所有しているドキシサイクリンは1mg/mlのものが全量5μlです。投与量に関しては、培地の量に対して1/500のドキシサイクリンを投与と指示されました。
実験条件としては、ドキシサイクリンの濃度を1mg/ml,0.5mg/ml,0.25mg/mlと変化させ、それぞれ1日、2日、3日培養のものとサンプルを作りたいと思考中です。つまりトータルののさんふまサンプル数は9つです。使う培地の量ですが、サンプル1つにつき(ディッシュ)1mlです。なので投与すべきドキシサイクリンは培地に対して1/500なので2μlだと考えます。
そこで、ドキシサイクリンが5μlしかないので、どのように上記の濃度を調整しようかと考えているのですが、何か良い案は無いでしょうか？希釈するのであれば、全サンプル9つにおけるドキシサイクリンの必要量を求めないといけないと思うのですが...。
　

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No.4117-8 - 2015/05/24 (日) 17:32:21 - AP

希釈列の作り方については、
http://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech2012/biotechforum.cgi?mode=view;Code=4119

希釈列をちゃんとつくろうとすると、必要量ギリギリでは難しいです。

(無題)

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No.4117-7 - 2015/05/24 (日) 11:00:03 - AP

>1mg/ml,0.5mg/ml,0.25mg/ml
は mgではなくてmicrogの間違いだとします。原液が1 mg/mLのものを希釈して1mg/mlに出来るわけないですから。ちなみにインターネット上では基本的にプレインテキストとし通らないので、fontのmをsymbol フォントにしたときにでるギリシャ文字マイクロは、フォントが区別されずmになりますし、日本語フォントにあるギリシャ文字マイクロは、機種依存文字なので文字化けします。
そのため、ギリシャ文字マイクロを英小文字uで代用することがありますが、これはタイプライター時代からの伝統です。

で、言いたいのは、
100%ロスなくできたとしても0.25 uL分（0.25 ug/ml群1枚分）足りないではないか。

1 mLに2 uLで入れるとか考えずに、純粋に1 mLの培地に1 mg/mL = 1 ug/uLの原液を入れて、1, 0.5, 0.25 ug/mLにするとしたら、
1 ug/mLには1 uL
0.5 ug/mLには0.5 uL
0.25 ug/mLには0.25 uL
の原液が必要です。それをそれぞれ３倍したら、総量5 uL超えちゃうよ。

(無題)

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No.4117-6 - 2015/05/22 (金) 20:24:12 - おお

1mg/ml,0.5mg/ml,0.25mg/ml
mgではなくってugでは、、、あとないものは添加できないですが、、、

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No.4117-5 - 2015/05/22 (金) 17:42:33 - mon

Doxの濃度は、細胞にもよりますがMax 1ug/mLくらいではなかったかな？
また、(1/2)^n希釈では余り差がでないかも？
http://www.takara-bio.co.jp/goods/catalog/pdf/tet.pdf
Manualもよく読みましょう。

(無題)

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No.4117-4 - 2015/05/22 (金) 17:14:20 - BBQ

あまりよくわかっておられないようですので、指示された人に相談しながら調製するのが良いと思います。