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(無題) 削除/引用 No.4111-2 - 2015/05/21 (木) 21:39:15 - もふもふ とりあえず、基本的な培養・実験条件を書かれてはいかがでしょうか。 また、細胞は培養中の人から継代時に分けてもらったもので、 weriさんの細胞だけ問題が生じているのか、 それとも凍結ストックから起こしたばかりのものなのかも記載すると、 他の人からアドバイスがもらいやすいと思います。 フィーダーを使用しているので ヒトES/iPSのコンベンショナルな培養系であると仮定して、 播種時の生存率50%は低すぎます。 培養時にクランプを小さくしすぎないよう気をつけてください。 短期的にはROCK阻害剤を添加して様子を見てはどうですか。 あとは、培地の調製等基本的なところから見なおしたほうがいいかもしれません。 2-MEを100倍入れていたとか案外よくある話です。

iPS細胞オンフィーダー培養時の細胞剥離 削除/引用 No.4111-1 - 2015/05/20 (水) 18:52:36 - weri 最近iPS細胞のオンフィーダー培養を始めたものです。 培養1日目でコロニーができてきたと思ったのですが、 2日目、3日目と経つにつれてせっかくできてきたと思ったコロニーが 剥がれてしまってきています。 何分初心者なもので原因特定がしずらく、アドバイスいただきたい次第です。 自分で考えた原因としては、恐らく最初から細胞の状態が悪かった(播種時の生存率50%程度では低すぎるでしょうか)、または播種細胞数が少なくアポトーシスを起こしているのではないかと考えましたが、他に何か思い当たる原因はありますでしょうか。 分析はまだかけていませんが、形態としては剥がれた細胞は少し黒ずんでいるような気がします。 何分初心者なもので、次回どこを改善したら良いか迷っています。 よろしくお願い申し上げます。

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