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リガンド結合アッセイのプロトコル トピック削除
No.4108-TOPIC - 2015/05/19 (火) 19:22:56 - ちびこ
マウス脳におけるGABA(A)受容体の発現分布を調べています。

放射性リガンドもしくは蛍光標識リガンドを用いて、トラフィッキングの途上にある細胞内のポピュレーションを染色することなく、ニューロンの細胞膜表面に局在している受容体のみを染色し、脳の各部でのGABA(A)j受容体の表面発現量を調べたいのですが、プロトコルが分かりません。

今のところ考えている大雑把な手順は、
１）BODIPY TMR-X Muscimolをマウスに静注
２）脳を摘出、切片作成
３）蛍光顕微鏡で観察
というものですが、BODIPY TMR-X Muscimolがin vvivoで安定かどうか、必要な投与量、投与時間、血液脳関門を通過できるか、切片作成操作に耐えうるか、等々不明なことばかりです。

以上の点について、よいプロトコルや情報がありましたら、御教示いただけるとありがたいです。
　
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リガンド結合アッセイのプロトコル 削除/引用
No.4108-1 - 2015/05/19 (火) 19:22:56 - ちびこ
マウス脳におけるGABA(A)受容体の発現分布を調べています。

放射性リガンドもしくは蛍光標識リガンドを用いて、トラフィッキングの途上にある細胞内のポピュレーションを染色することなく、ニューロンの細胞膜表面に局在している受容体のみを染色し、脳の各部でのGABA(A)j受容体の表面発現量を調べたいのですが、プロトコルが分かりません。

今のところ考えている大雑把な手順は、
１）BODIPY TMR-X Muscimolをマウスに静注
２）脳を摘出、切片作成
３）蛍光顕微鏡で観察
というものですが、BODIPY TMR-X Muscimolがin vvivoで安定かどうか、必要な投与量、投与時間、血液脳関門を通過できるか、切片作成操作に耐えうるか、等々不明なことばかりです。

以上の点について、よいプロトコルや情報がありましたら、御教示いただけるとありがたいです。
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