Bio Technical フォーラム

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SDS-PAGE による GAPDH 含有量の比較 トピック削除
No.4085-TOPIC - 2015/05/10 (日) 00:42:54 - Beginner
実験を始めたばかりの初心者ですが、どうぞご教授よろしくお願い致します。

ある複数のサンプル中に含まれる GAPDH 量を SDS-PAGE により比較したいのですが、あるサンプルで非常に多くのバンドが検出されてしまい、GAPDH の 39kDa 付近にも複数のバンドが出ているので Imagej にて比較することができません。
できる限り SDS-PAGE にて比較したいです。
なにかよい精製方法等はあるでしょうか。全くの素人の質問で申し訳ありませんが、どうぞよろしくお願い致します。
 
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No.4085-5 - 2015/05/10 (日) 01:41:49 - おお
クロマトグラフの定量の方法論をいろいろ調べてみるといいかもしれませんが、ピーク値のあたいをとるとか、バックグランドの引き方とか、色々なメソッドとその利点、欠点などキャラクタライズされているとおもいますので、その状況下でベストなやり方を選べるとはおもいますが、、、

(無題) 削除/引用
No.4085-4 - 2015/05/10 (日) 01:23:54 - Beginner
おお様

また、ゲル濃度を低く設定し分離をよくすることで
少しでも改善できるかも試してみたいと思います。

(無題) 削除/引用
No.4085-3 - 2015/05/10 (日) 01:15:41 - Beginner
おお 様

親切なご教授、誠にありがとうございます。
私達のラボでは抗 GAPDH 抗体を持ちあわせておらず、本来ならば
おお様が仰る通り、ELISA や WB にて比較しなければならないと私も思っております。
しかしながら現在のところ購入予定はありません(泣)
ですが酵素活性は測定できるので早速やってみたいと思います。
ありがとうございました。

(無題) 削除/引用
No.4085-2 - 2015/05/10 (日) 00:50:00 - おお
WBとかELISAじゃだめなんですか?

あとは活性はかるとか、、、(確かに活性は蛋白量ではないんですけど)

SDS-PAGE による GAPDH 含有量の比較 削除/引用
No.4085-1 - 2015/05/10 (日) 00:42:54 - Beginner
実験を始めたばかりの初心者ですが、どうぞご教授よろしくお願い致します。

ある複数のサンプル中に含まれる GAPDH 量を SDS-PAGE により比較したいのですが、あるサンプルで非常に多くのバンドが検出されてしまい、GAPDH の 39kDa 付近にも複数のバンドが出ているので Imagej にて比較することができません。
できる限り SDS-PAGE にて比較したいです。
なにかよい精製方法等はあるでしょうか。全くの素人の質問で申し訳ありませんが、どうぞよろしくお願い致します。

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