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(無題) 削除/引用 No.4075-12 - 2015/05/09 (土) 15:20:25 - おお むだに下げられるのはくやしいのであげとこ

(無題) 削除/引用 No.4075-11 - 2015/05/08 (金) 00:35:09 - １qw２３え４r５t６y７う８ あとあれだわ、溶出はSDS-sample bufferじゃなくてpH2~3くらいのbuffer(SDS等の変性剤は入れない）でやるとだいぶBG下がることある。SDSは洗剤だから、ビーズにくっついた蛋白質からなる汚れを洗い出すので、そういう洗い出された大量の汚れは溶出液に混入して結果的にBGを上げることになるから。

(無題) 削除/引用 No.4075-10 - 2015/05/08 (金) 00:24:48 - １qw２３え４r５t６y７う８ ビーズそのものを変えることと、IPの反応時間を必要最小限（4Cで１時間くらいでもいける場合も意外とあるから一度検討する価値はある）にすること、遠心なしでできる磁性ビーズを使うこと（遠心はかなり確実にhigh BGの原因になってる気が前からすごいしてる）が一番確実とおもう、てか界面活性剤とかbuffer組成変更とかブロッキングとかプレクリーンとか昔からいろいろ方法はあるけどどれも劇的な改善は難しいし、前と比べれば多少ましかなくらいが現実なような気がするし。最近はバックグラウンドが低いことを特徴とするビーズもいろいろ売られてるみたいだし、可能ならば、代理店の人に相談して、いくつかの会社からサンプルでもらって比較検討するとかもいいとおもう。

(無題) 削除/引用 No.4075-9 - 2015/05/07 (木) 11:44:43 - おお >[Re:6] qwさんは書きました : > 自分でもちょっと調べてみた。 > Anal biochem, 206,397-399 (1993) PMID: 8095775 > が一番古そうかな。 > PVPはWBでつかってます。きれいにいく印象があがります。それにミルクほど腐る可能性がないので一次抗体使い回しをするようになりました。SN比が論文に書かれていたので具体的にブロッキングの効果がわかり参考になりました。

(無題) 削除/引用 No.4075-8 - 2015/05/07 (木) 11:40:37 - おお そうですね。支持体についているとおもってます。なのでブロッキングのくふうかなとおもって、、、BSAぐらいではだめでした。ミルクですか、、、IPではかんがえなかった。。。です。。。

(無題) 削除/引用 No.4075-7 - 2015/05/07 (木) 11:04:09 - mon となると、ブロッキング剤を変えた方が早いかも。IgGに非特異吸着するというよりは基剤が問題となるとことが多いので。 混合物なので使いづらいためかIPでは使用しないことが多いけど、ご存知のように特定用途以外ではSkim Milkは割りと万能。あるいは複数種ブレンドするとか？

(無題) 削除/引用 No.4075-6 - 2015/05/07 (木) 07:52:44 - qw 自分でもちょっと調べてみた。 Anal biochem, 206,397-399 (1993) PMID: 8095775 が一番古そうかな。

(無題) 削除/引用 No.4075-5 - 2015/05/06 (水) 21:50:01 - おお >[Re:3] monさんは書きました : > ノンスペを減らす方法として、pHを変える、塩濃度を変える、クエン酸ナトリウム添加、アルギニン添加、高濃度MgCl2など、ストリッピング法の処方を薄めてはいかがでしょうか。 > 低分子PEG、Betaine、NDSB201とかも効果あるかな？？ たしかにいろいろやってはいるんですけど、、、なかなか頑固なんです。

(無題) 削除/引用 No.4075-4 - 2015/05/06 (水) 21:48:42 - おお >[Re:2] qwさんは書きました : > 経験として：dynabeadsにABを結合させる時とblockingするところで、2%PVP K25 in TBS-0.05%Tween20、20分程度@rt. > ありがとうございました。あ、やはりそう言うプロとコールはありぞうですね。

(無題) 削除/引用 No.4075-3 - 2015/05/06 (水) 20:44:36 - mon ノンスペを減らす方法として、pHを変える、塩濃度を変える、クエン酸ナトリウム添加、アルギニン添加、高濃度MgCl2など、ストリッピング法の処方を薄めてはいかがでしょうか。 低分子PEG、Betaine、NDSB201とかも効果あるかな？？

(無題) 削除/引用 No.4075-2 - 2015/05/06 (水) 16:28:02 - qw 経験として：dynabeadsにABを結合させる時とblockingするところで、2%PVP K25 in TBS-0.05%Tween20、20分程度@rt.

polyvinylpyrrolidone in IP buffer 削除/引用 No.4075-1 - 2015/05/06 (水) 12:17:44 - おお immunoprecipitation のバッファーにpolyvinylpyrrolidoneをいれているプロトコールを見たことありませんでしょうか。またはご経験などございませんでしょうか。出典などもあればたすかります。そのたノンすぺをへらす方法でかわったほうほうなどご存じであればおしえてください

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