Bio Technical フォーラム

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DNA断片にプライマーを結合させたPCR トピック削除
No.4057-TOPIC - 2015/04/27 (月) 20:49:34 - AAA
プラスミドベクターにフォワード,リバースプライマーをそれぞれ結合させPCRを行うことでプライマーにはさまれた部分のDNA断片が増幅されるとおもうのですが,
抽出してきたDNA断片にフォワード,リバースプライマーをそれぞれ結合させさらにプライマーにはさまれた部分のDNA断片を増幅することはできるのでしょうか.
 
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校正してみた 削除/引用
No.4057-6 - 2015/04/29 (水) 13:33:25 - mon
プラスミドを「鋳型にして」フォワード,リバースプライマーをそれぞれ「アニール」させPCRを行うことで「「プライマー配列およびプライマーにはさまれた領域」」のDNA断片が増幅され「ますが」、「増幅後、アガロースゲル電気泳動で目的バンドを含むゲル片から抽出した」DNA断片を「鋳型にして同じプライマーペアを使って」目的DNA断片を「再度」増幅することはできるのでしょうか.

PCRの原理として「プライマー配列およびプライマーにはさまれた領域が増幅」の部分を誤解していたのかな?
ちなみに、「結合」でも間違いではないが誤解しやすいので、DNA同士ならアニール、もしくはハイブリダイズの方が通じやすいよ。

校正してみた 削除/引用
No.4057-5 - 2015/04/29 (水) 13:31:18 - mon
プラスミドを「鋳型にして」フォワード,リバースプライマーをそれぞれ「アニール」させPCRを行うことで「「プライマー配列およびプライマーにはさまれた領域」」のDNA断片が増幅され「ますが」、「増幅後、アガロースゲル電気泳動で目的バンドを含むゲル片から抽出した」DNA断片を「鋳型にして同じプライマーペアを使って」目的DNA断片を「再度」増幅することはできるのでしょうか.

PCRの原理として「プライマー配列およびプライマーにはさまれた領域が増幅」の部分を誤解していたのかな?

(無題) 削除/引用
No.4057-4 - 2015/04/28 (火) 22:12:49 - モモ
質問は上手だとは言えないけど、テンプレートの違いを聞いているぐらいは理解可能な表現と思いました。

(無題) 削除/引用
No.4057-3 - 2015/04/28 (火) 21:18:42 - 小言幸兵衛
何を尋ねてるかちょっと(全く)わからない・・・

(無題) 削除/引用
No.4057-2 - 2015/04/27 (月) 20:59:06 - おお
できます。そう言うことをやることは場合によってはあるとおもいます。

DNA断片にプライマーを結合させたPCR 削除/引用
No.4057-1 - 2015/04/27 (月) 20:49:34 - AAA
プラスミドベクターにフォワード,リバースプライマーをそれぞれ結合させPCRを行うことでプライマーにはさまれた部分のDNA断片が増幅されるとおもうのですが,
抽出してきたDNA断片にフォワード,リバースプライマーをそれぞれ結合させさらにプライマーにはさまれた部分のDNA断片を増幅することはできるのでしょうか.

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