お世話になります。
(巷で普通に行われている)all-trans retinoic acid (RA)によるNeuro2aの分化方法について質問です。
私にとっては初めての処置であり、論文を参考に進めました。
<方法>
Neuro2aをDMEM, 10%FBSで培養し、分化誘導時には、DMEM, 2%FBSに終濃度20 μMになるようにRAを加えて(以下RA入り培地)から細胞に処置します。
<結果>
処置後2日目までは神経突起様のものが散見されたのですが、4日後では、80%以上の細胞が浮いてしまっていました。
そこで2点質問なのですが、
@RA入り培地は4日間無交換でしたがこれでよいのでしょうか。
Aカルチャーディッシュに何らかのコーティングを施さないと神経様に分化したときに張り付かなくなるのでしょうか。
論文ではわからない現場のご意見賜りたく思います。 |
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