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SDS-PAGE gelの作成時に気泡が入ってしまう トピック削除
No.4029-TOPIC - 2015/04/18 (土) 14:30:06 - haruki
SDS-PAGEで低分子量のタンパク質の検出のために13~15%のゲルで泳動をしているのですが、ゲルの作成時に気泡が毎回入ってしまい使えるレーンが減ってしまい苦戦しています。

Lower gelが固まった時点ではゲル内に気泡はできないのですが、Upper gelが固まった後にゲルの両端に近いレーンに気泡が入ります。おそらくゲルが固いため液体から半固体になるときに体積が減少しているせいだと思うのですが、この気泡が入らないようにする方法はありませんか?
ちなみに同じ操作で10%ゲルを作成すると気泡は一切入りません。
 
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No.4029-8 - 2015/04/19 (日) 14:58:12 - 名無し
13ないし15%くらいだと、重合する過程で少し発熱するとおもうので、そういう事も関係あるのかな。別に泳動自体に支障をきたすようことが無ければ、気にしなくていいとおもうけど、それがなにか結果にかなり影響してそうならば作成したゲル溶液を脱気してからTEMED入れて板に流し込めばいいんじゃね。
あと、ゲルと板の間に入ってしまった少々の気泡は(かなり大量だとわかんないけど)泳動には影響しないよ。

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No.4029-7 - 2015/04/19 (日) 13:32:22 - おお
コームの両端のゲル板との隙間から入る気泡は、まずゲルをいれて、コームをさして、両端にTEMED1ulぐらいをゲル板の上の方から注いでやるといいかと思います。それで両端の上部がすぐにゲル化してシールされるので。

upper gelの濃度もlower gelの濃度が高いなら少し高めでもいいかもしれません。5%とか5.5%とか6%とか。

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No.4029-6 - 2015/04/19 (日) 12:19:14 - TS
たぶんコームの両端に隙間がわずかにあって、
ゲル化が進む時に気泡が入ることがあって、その部分はゲルがうまく固まらないので
ウェルがうまく作られなくてローディングできないのでは?

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No.4029-5 - 2015/04/19 (日) 04:56:40 - おお
ゲルとガラスの間にはいる気泡は私も大丈夫だと思います。

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No.4029-4 - 2015/04/18 (土) 23:15:35 - 中年
気泡といっても、ゲル内に入るのではなく、ゲルとガラス板の間に入るのでしょうから、実害はあまりないのでは?

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No.4029-3 - 2015/04/18 (土) 15:08:31 - おお
Lowerが冷えて縮まるというのであれば、lowerが固まった時点で一度冷やして縮めてしまえばどうなりますか?

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No.4029-2 - 2015/04/18 (土) 15:06:19 - おお
>後にゲルの両端に近いレーンに気泡が入ります。

具体的にどこですか?upperとlowerの間ですか?それともコーム側の端の方から抜けていくので、最初の両端のレーんがゲルの端っこまで続いてしまうということですか?
ゲル内に泡が入った状態で固まるということですか?

SDS-PAGE gelの作成時に気泡が入ってしまう 削除/引用
No.4029-1 - 2015/04/18 (土) 14:30:06 - haruki
SDS-PAGEで低分子量のタンパク質の検出のために13~15%のゲルで泳動をしているのですが、ゲルの作成時に気泡が毎回入ってしまい使えるレーンが減ってしまい苦戦しています。

Lower gelが固まった時点ではゲル内に気泡はできないのですが、Upper gelが固まった後にゲルの両端に近いレーンに気泡が入ります。おそらくゲルが固いため液体から半固体になるときに体積が減少しているせいだと思うのですが、この気泡が入らないようにする方法はありませんか?
ちなみに同じ操作で10%ゲルを作成すると気泡は一切入りません。

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