最近パッチクランプを始めたものですが、思うようにデータが取れないため、ご相談させていただきます。
マウス臓器にトレーサーを打ち、1週後に麻酔下にDRG採取。
採取後、速やかにon iceでDMEM内でDRGに2か所ほど切り込みを入れた後、
コラゲナーゼ、DNase、トリプシン入りDMEM内で15分 35.4度incubate。
trituration後、再度5分追加でincubateした後、MEMに置換。7つのdishに分けて37度, o/nした後にパッチクランプをやっています。この条件でやると、1つのdishで1つか2つの細胞でデータが取れればいいほうで、1日に数個のみということもあり、どうすれば良いか困っております。もし同じような条件でやられている方がいらっしゃるよるようでしたら、ご助言いただけないでしょうか。よろしくお願いします。 |
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