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TUNEL染色について(和光) トピック削除
No.3991-TOPIC - 2015/04/07 (火) 19:30:08 - こじ
現在和光のキットを用いてTUNEL染色を使用としています。

キットのプロトコルに従いホルマリンで固定した小腸の切片を染色しているのですがポジティブコントロールすら染められないです。

そこで和光のキットを用いて染色をされたかたがいらっしゃいましたら、プロトコル通りに反応時間をされたのかどうか教えていただきたいです。
また問題が起きやすいような注意すべき点などがありましたら教えていただきたいです。

よろしくおねがいします。
　
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(無題) 削除/引用
No.3991-11 - 2015/05/08 (金) 10:06:24 - おお
すずさんありがとうございました。読んでいる人にとって有用な情報になったと思います。

(無題) 削除/引用
No.3991-10 - 2015/05/08 (金) 09:40:26 - すず
>[Re:6] APさんは書きました :
> 「強烈にバックグラウンドが高い」のと、ポジティブコントロールすら「染められない」というのは同列にはできないなあ。

ホントですよね〜真逆ですもんね

ブロッキングは牛血清30％1時間室温で
TUNEL反応溶液は5倍希釈しました

(無題) 削除/引用
No.3991-8 - 2015/05/08 (金) 02:00:52 - AA
プロメガのキットの時のことですが、
付属のDABを使うとコントラストが悪くシグナルが弱かったので
DABだけ別個に用意してやっていたことはあります。

(無題) 削除/引用
No.3991-7 - 2015/05/07 (木) 21:16:53 - おお
>[Re:5] すずさんは書きました :
> ポジコンはDNase1です
> 強烈にバックが高すぎるのを抑えるのに苦労しました
> ブロッキングの調整と、TUNEL反応溶液を希釈することで
> 10回の条件検討でなんとか本番に行けました
>

ありがとうございました。差し支えなければ、どの様なブロッキング剤が有効で、どの程度希釈されたのかについてコメントいただけますか?

(無題) 削除/引用
No.3991-6 - 2015/05/07 (木) 19:37:03 - AP
「強烈にバックグラウンドが高い」のと、ポジティブコントロールすら「染められない」というのは同列にはできないなあ。

(無題) 削除/引用
No.3991-5 - 2015/05/07 (木) 15:45:44 - すず
ポジコンはDNase1です
強烈にバックが高すぎるのを抑えるのに苦労しました
ブロッキングの調整と、TUNEL反応溶液を希釈することで
10回の条件検討でなんとか本番に行けました

(無題) 削除/引用
No.3991-4 - 2015/05/01 (金) 14:40:33 - おお
>[Re:1] こじさんは書きました :
> 現在和光のキットを用いてTUNEL染色を使用としています。
>
> キットのプロトコルに従いホルマリンで固定した小腸の切片を染色しているのですがポジティブコントロールすら染められないです。

ポジティブコントロールは具体的に何をお使いになりましたか?

(無題) 削除/引用
No.3991-3 - 2015/05/01 (金) 14:39:02 - おお
>[Re:2] すずさんは書きました :
> ワタシも　かなり苦労しました。
> サンプルはマウス肺です
> 使ったのは和光のKitではなく
> http://roche-biochem.jp/catalog/product_3.5.3.21.2.6
> ロシュcat.1684817です

せっかくですから具体的にどの様に苦労されたのか開示していただけませんか?

初心者です 削除/引用
No.3991-2 - 2015/05/01 (金) 14:19:01 - すず
ワタシも　かなり苦労しました。
サンプルはマウス肺です
使ったのは和光のKitではなく
http://roche-biochem.jp/catalog/product_3.5.3.21.2.6
ロシュcat.1684817です

TUNEL染色について(和光) 削除/引用
No.3991-1 - 2015/04/07 (火) 19:30:08 - こじ
現在和光のキットを用いてTUNEL染色を使用としています。

キットのプロトコルに従いホルマリンで固定した小腸の切片を染色しているのですがポジティブコントロールすら染められないです。

そこで和光のキットを用いて染色をされたかたがいらっしゃいましたら、プロトコル通りに反応時間をされたのかどうか教えていただきたいです。
また問題が起きやすいような注意すべき点などがありましたら教えていただきたいです。

よろしくおねがいします。
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