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アイソタイプコントロールの設定がない市販抗体 トピック削除
No.3970-TOPIC - 2015/03/29 (日) 01:18:05 - めんえき初心者
ラットの非常にマイナーな抗原に対する抗体(抗体を売っているところが2社しかない)を用いて免染とFACSをしようと思っています。上記の手法では1次抗体のホスト動物由来の isotype control を用いると思いますが、今回用いたい抗体に対応するアイソをメーカーが販売していませんでした。このような場合、先生方は他社製の適当なアイソ(IgGx を揃えるだけ)を使っていらっしゃいますでしょうか??原理を考えるとOKと思うのですが、通常は1次抗体のメーカーがアイソも用意しているものと思い、質問させていただきました。ちなみに1次標識抗体ではないので標識の数は気にしなくていい状況です。
 
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No.3970-4 - 2015/04/03 (金) 20:50:48 - めんえき初心者
みなさま

お返事ありがとうございます。原理的には濃度を揃えればよいが、メーカー違いの場合にはバックの強さに違いが出うるのですね。添加物等の影響もあるのでしょうか。可能な限り条件を揃えるなら、透析して同濃度に再調製して使用などが善後策でしょうか。一度試してみます。

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No.3970-3 - 2015/03/30 (月) 22:39:15 - protein
経験的にはisotype IgGはメーカーが違うとシグナルが若干異なる印象です。
なので抗体で強いシグナルが得られればいいのですが、そうでない場合は慎重な解釈が必要と思います。

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No.3970-2 - 2015/03/29 (日) 01:38:49 - いや
そうですね。濃度が違う可能性もありますのでそこはきちんと揃えてから染色をしてください。

アイソタイプコントロールの設定がない市販抗体 削除/引用
No.3970-1 - 2015/03/29 (日) 01:18:05 - めんえき初心者
ラットの非常にマイナーな抗原に対する抗体(抗体を売っているところが2社しかない)を用いて免染とFACSをしようと思っています。上記の手法では1次抗体のホスト動物由来の isotype control を用いると思いますが、今回用いたい抗体に対応するアイソをメーカーが販売していませんでした。このような場合、先生方は他社製の適当なアイソ(IgGx を揃えるだけ)を使っていらっしゃいますでしょうか??原理を考えるとOKと思うのですが、通常は1次抗体のメーカーがアイソも用意しているものと思い、質問させていただきました。ちなみに1次標識抗体ではないので標識の数は気にしなくていい状況です。

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