Bio Technical フォーラム

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ラット胎仔からの心筋細胞単離について トピック削除
No.397-TOPIC - 2012/04/11 (水) 22:28:32 - ベース
ラット胎仔から心筋細胞を酵素法により単離、培養しています。
しかしながら、最近細胞の収集率が低く困っております。
具体的な方法といたしまして、ラット胎仔から心臓を採取し、PBSで洗浄後、剪刃で細切りします。その後1%コラゲナーゼ(typeT,350U/mg)溶液を加え、37℃で8分間振とうし、その溶液のみをフィルター(メッシュサイズ80µm)を通して細胞を得ています。この動作を4回繰り返しています。
以前まではこのプロトコルで心筋細胞を得ていましたが、最近は従来の4分の1程度です。まったく原因がわからず困っております。剪刃での細切りが不十分なのか、コラゲナーゼの活性が悪いのか、どんなことでも良いのでアドバイスをいただければ幸いです。
　
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(無題) 削除/引用
No.397-2 - 2012/04/13 (金) 00:40:55 - grad
まずは新しいコラゲナーゼを試されるのが良いかと思います。
昔、同じ方法で単離していましたが、古いコラゲナーゼを使ったときに収量が落ちるのを経験しました。
また、酵素反応時は振盪ではなくスターラーで攪拌していたのですが、スターラーバーを変更したときに収量が下がってしまい、攪拌速度を上げた経験があります。
酵素反応時にコラゲナーゼが浸透するかどうかも収量の良し悪しに関わってくる印象です。

ラット胎仔からの心筋細胞単離について 削除/引用
No.397-1 - 2012/04/11 (水) 22:28:32 - ベース
ラット胎仔から心筋細胞を酵素法により単離、培養しています。
しかしながら、最近細胞の収集率が低く困っております。
具体的な方法といたしまして、ラット胎仔から心臓を採取し、PBSで洗浄後、剪刃で細切りします。その後1%コラゲナーゼ(typeT,350U/mg)溶液を加え、37℃で8分間振とうし、その溶液のみをフィルター(メッシュサイズ80µm)を通して細胞を得ています。この動作を4回繰り返しています。
以前まではこのプロトコルで心筋細胞を得ていましたが、最近は従来の4分の1程度です。まったく原因がわからず困っております。剪刃での細切りが不十分なのか、コラゲナーゼの活性が悪いのか、どんなことでも良いのでアドバイスをいただければ幸いです。
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